[发明专利]MMP-9纳米抗体及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种MMP-9纳米抗体，其特征在于，所述MMP-9纳米抗体为单域抗体，且所述单域抗体包括互补决定区CDR，所述互补决定区包括CDR1、CDR2、CDR3；

其中，所述CDR1的氨基酸序列选自SEQ.ID No.1～SEQ.ID No.5中的任一种，

所述CDR2的氨基酸序列选自SEQ.ID No.6～SEQ.ID No.9中的任一种，

所述CDR3的氨基酸序列选自SEQ.ID No.10～SEQ.ID No.14中的任一种。

2.根据权利要求1所述的MMP-9纳米抗体，其特征在于，所述MMP-9纳米抗体的互补决定区选自如下：

所述CDR1的氨基酸序列选自SEQ.ID No.1、所述CDR2的氨基酸序列选自SEQ.ID No.6、所述CDR3的氨基酸序列选自SEQ.ID No.10；和/或，

所述CDR1的氨基酸序列选自SEQ.ID No.2、所述CDR2的氨基酸序列选自SEQ.ID No.7、所述CDR3的氨基酸序列选自SEQ.ID No.11；和/或，

所述CDR1的氨基酸序列选自SEQ.ID No.3、所述CDR2的氨基酸序列选自SEQ.ID No.7、所述CDR3的氨基酸序列选自SEQ.ID No.12；和/或，

所述CDR1的氨基酸序列选自SEQ.ID No.4、所述CDR2的氨基酸序列选自SEQ.ID No.8、所述CDR3的氨基酸序列选自SEQ.ID No.13；和/或，

所述CDR1的氨基酸序列选自SEQ.ID No.5、所述CDR2的氨基酸序列选自SEQ.ID No.9、所述CDR3的氨基酸序列选自SEQ.ID No.14。

3.根据权利要求1所述的MMP-9纳米抗体，其特征在于，所述单域抗体包括框架区FR，所述框架区包括FR1、FR2、FR3、FR4；

其中，所述FR1的氨基酸序列选自SEQ.ID No.15～SEQ.ID No.19中的任一种，

所述FR2的氨基酸序列选自SEQ.ID No.20～SEQ.ID No.24中的任一种，

所述FR3的氨基酸序列选自SEQ.ID No.25～SEQ.ID No.29中的任一种，

所述FR4的氨基酸序列选自SEQ.ID No.30～SEQ.ID No.34中的任一种。

4.一种MMP-9纳米抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

通过对多个天然文库大量测序比对分析，分别设计CDR区中CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸突变位点并合成CDRs突变引物；

提供合成得到的纳米抗体模板序列，对所述纳米抗体模板序列进行密码子优化并引入限制性内切酶的酶切位点，得到优化纳米抗体模板序列；

将所述优化纳米抗体模板序列插入噬菌粒载体构建重组噬菌粒，将所述重组噬菌粒进行噬菌体展示后提取单链DNA，利用Kunkel突变法把所述CDRs突变引物与所述单链DNA进行配对合成异源双链DNA，并转化至到大肠杆菌中培养得到噬菌体突变文库；

用所述噬菌体突变文库针对MMP-9进行筛选、纯化得到MMP-9纳米抗体。

5.根据权利要求4所述的MMP-9纳米抗体的制备方法，其特征在于，所述CDRs突变引物包括CDR1突变引物，CDR2突变引物和CDR3突变引物，

所述CDR1突变引物的碱基序列为SEQ.ID No.35所述SEQ.ID No.35为3’-TTAAGCTGTGCAGCATCTGGTWVCATTTYTNNCNNCNNCNNCATGGGTTGGTATCGTCAAGCA-5’；和/或，

所述CDR2突变引物的碱基序列为SEQ.ID No.36，所述SEQ.ID No.36为3’-AAAGAACGCGAATTAGTTGCCRSCATTRVCNNCGGTRSCANCACCWATTATGCGGATAGCGTGAAAG-5’；和/或，

所述CDR3突变引物的碱基序列为SEQ.ID No.37，所述SEQ.ID No.37为3’-CTGCAGTGTATTATTGTGCAGYGNNBNNBNNBNNBNNBNNBNNBNNBNNBNNBNNBYWTNNBTATTGGGGTCAAGGTACTCAA-5’。