[发明专利]MMP-9纳米抗体及其制备方法与应用

说明书

本申请涉及生物医药技术领域，提供了一种MMP‑9纳米抗体，所述MMP‑9纳米抗体为单域抗体，且所述单域抗体包括互补决定区CDR，所述互补决定区包括CDR1、CDR2、CDR3，并提供了CDR1、CDR2、CDR3可选的具体氨基酸序列，其中，得到的该MMP‑9纳米抗体为特异性针对MMP‑9催化域的活性位点的单域抗体，将CDR3区延长，能够提高对MMP‑9催化域的亲和性，使该纳米抗体能够特异性且强有力与催化域的活性位点结合，并且分子量小，穿透能力强，稳定性高，副作用低，能够大量进行表达，使得该纳米抗体能够较好抑制MMP‑9的活性，进而具有良好的抑制乳腺癌肿瘤转移的作用。

技术领域

本申请属于生物医药技术领域，尤其涉及一种MMP-9纳米抗体及其制备方法与应用。

背景技术

基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteins，MMPs)，是一类由28个家族成员组成的一种钙依赖含锌内肽酶，可以通过裂解细胞外基质中几乎所有的成分，在ECM的转换过程中起关键作用。

其中，基质金属蛋白酶9(Matrix metalloprotein 9，MMP-9)是MMPs家族的重要成员之一，分子量为92kDa，属于明胶酶的一种，其作用底物广泛使MMP-9参与了许多与基体自身稳定相关的功能，且MMP-9的表达主要发生在中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、小胶质细胞、淋巴细胞、树突状细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞、角质形成细胞和肿瘤细胞中。目前，MMP-9在血管生成、肿瘤转移和侵袭中的作用已证实，此外MMP-9还负责癌细胞的生存和扩散，主要的，MMP-9基因多态性在乳腺癌患者中具有重要作用，并可识别乳腺癌的发生风险；更有研究发现，MMP-9与乳腺肿瘤的不良预后直接相关，通过抑制MMP-9可以阻碍肿瘤的进展作为治疗肿瘤的有效策略。

目前，MMP-9被认为是治疗乳腺癌的关键治疗靶点，但当前的抑制剂药物效果不尽人意，且具有巨大的副作用，均止步于临床。究其原因，第一代抑制剂主要靶向MMP-9酶催化位点上的Zn离子来抑制酶活性，然而它有胃肠道毒性，炎症，纤维化，出血和组织坏死等主要不良反应，且溶解性差。第二，MMP-9的抗体均为传统的单克隆抗体，单克隆抗体药物分子量大不能进入酶活性位点，虽然特异性结合MMP-9,但不足以抑制MMP-9的酶活性，同时单克隆抗体表达效率低，且亲和力和稳定性较差，导致无法广泛应用。

发明内容

本申请的目的在于提供一种MMP-9纳米抗体及其制备方法与应用，旨在解决现有技术中MMP-9抑制剂特异结合能力差，且稳定性弱并具有较大副作用的问题。

为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：

第一方面，本申请提供一种MMP-9纳米抗体，所述MMP-9纳米抗体为单域抗体，且所述单域抗体包括互补决定区CDR，所述互补决定区包括CDR1、CDR2、CDR3；

其中，所述CDR1的氨基酸序列选自SEQ.ID No.1～SEQ.ID No.5中的任一种，

所述CDR2的氨基酸序列选自SEQ.ID No.6～SEQ.ID No.9中的任一种，

所述CDR3的氨基酸序列选自SEQ.ID No.10～SEQ.ID No.14中的任一种。

第二方面，本申请提供一种MMP-9纳米抗体的制备方法，包括如下步骤：

通过对多个天然文库大量测序比对分析，分别设计CDR区中CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸突变位点并合成CDRs突变引物；

提供合成得到的纳米抗体模板序列，对所述纳米抗体模板序列进行密码子优化并引入限制性内切酶的酶切位点，得到优化纳米抗体模板序列；