[发明专利]一种基于生物工程蛋白的生物粘合剂及其制备方法

说明书

本发明属于生物粘合剂技术领域，公开了一种基于生物工程蛋白的生物粘合剂及其制备方法，所述基于生物工程蛋白的生物粘合剂按照质量份数计，由溶剂30～50份、生物工程蛋白20～35份、甲壳素晶须15～20份、爬山虎吸盘多糖10～15份、单宁酸8～12份、马来酰化透明质酸6～8份、催化剂2～4份组成。本发明提供的基于生物工程蛋白的生物粘合剂，选用生物相容性良好的爬山虎吸盘多糖为基体，采用生物工程蛋白、单宁酸、马来酰化透明质酸等作为原料，制备得到的生物粘合剂具有良好的生物相容性，对生物体组织刺激小，且能牢固粘连结合部位，具有抗水性、抗菌性、封闭止血和无细胞毒性的特点；制备方法简单，适合大规模生产。

技术领域

本发明属于生物粘合剂技术领域，尤其涉及一种基于生物工程蛋白的生物粘合剂及其制备方法。

背景技术

目前，生物粘合剂是利用生物相容性优异的材料制备而成的无菌、无免疫原性且在一定的时间内能够抑制细菌的生物医学材料。其组分中无溶剂或者溶剂为水，在湿态环境下(即有水、组织液、血液等存在情况下)仍可与机体组织产生一定强度的粘接。生物粘合剂的溶出物等不对机体细胞产生毒性，不影响机体组织的伤口愈合，并且材料自身可降解，满足使用要求后能够被人体组织吸收，并最终被代谢出人体。但现有生物粘合剂存在着粘合强度低、制备时间长、价格昂贵的缺点，并潜在的病毒感染风险。因此，亟需一种新的、简易高效、绿色制备的生物粘合剂及其制备方法。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有生物粘合剂存在着粘合强度低、制备时间长、价格昂贵的缺点，并潜在的病毒感染风险。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种基于生物工程蛋白的生物粘合剂及其制备方法。

本发明是这样实现的，一种基于生物工程蛋白的生物粘合剂，所述基于生物工程蛋白的生物粘合剂按照质量份数计，由溶剂30～50份、生物工程蛋白20～35份、甲壳素晶须15～20份、爬山虎吸盘多糖10～15份、单宁酸8～12份、马来酰化透明质酸6～8份、催化剂2～4份组成。

进一步，所述溶剂为去离子水、注射用水、生理盐水、庆大霉素生理盐水冲洗液、林格氏液冲洗液、甘露醇冲洗液、葡萄糖冲洗液、洗必泰冲洗液、甲硝唑冲洗液、甘氨酸冲洗液或生理平衡液中的任意一种。

进一步，所述生物工程蛋白为类弹性蛋白。

本发明的另一目的在于提供一种应用所述基于生物工程蛋白的生物粘合剂的基于生物工程蛋白的生物粘合剂的制备方法，所述基于生物工程蛋白的生物粘合剂的制备方法包括以下步骤：

步骤一，进行生物工程蛋白的制备：将类弹性蛋白ELP载体质粒转化进毕赤酵母或大肠杆菌表达菌株，挑取单克隆菌落，利用LB培养液进行过夜培养；将过夜活化的表达种子液加入TB培养基，待菌液达到OD600数值为0.8～1.0时，加入诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷并降温到30℃进行过量表达；诱导10～12h收集菌体，用裂解缓冲液重悬，加入混合菌剂，破碎菌体，于10000～12000rpm离心，收集上清液，HPLC纯化，得类弹性蛋白ELP，备用；

步骤二，进行甲壳素晶须的制备：称取虾蟹壳，将虾蟹壳破碎成粉末，分散在3M的浓硫酸中，置于85～95℃的水浴中搅拌10～12h，去离子水稀释，离心去除上清，重复3～5次，得沉淀；将所得沉淀用去离子水重悬，转移至截留分子量为8000～14000Da的透析袋中，充分透析至透析袋内悬液的pH为6.0；于600～800W功率下超声处理10～30min使沉淀完全悬浮，将所得悬液于7000～7500rpm离心，冻干5～20min，得甲壳素晶须，备用；