[发明专利]一种利用红曲细胞固定化技术制备亳菊酵素原液的方法

权利要求书

1.一种利用红曲细胞固定化技术制备亳菊酵素原液的方法，其特征在于包括如下步骤：

步骤1：亳菊汁的制备

以亳菊作为原料，将亳菊洗净，然后在臭氧水中进行过流式浸没杀菌5～15分钟，沥干后去皮、打汁，备用；

步骤2：红曲菌种子液的制备

将红曲菌通过斜面划线的方法培养在PDA斜面培养基中，30～37℃培养3～5天；再将斜面菌种接种于液体培养基，培养72～96h，获得红曲菌种子液，待用；

步骤3：红曲菌与载体的固定化吸附处理

3a、膨化裂解处理：载体水洗烘干后，粉碎并过筛，然后在70～90℃条件下加热处理15～25min，随后在100℃下以NaHCO₃溶液膨化处理20～30min，即得到处理后的载体；

3b、运用静电磁化法将40～60份载体和50～70份红曲霉菌种充210～230V的静电进行磁化，载体经过在正极被磁化后将会带有正电阳离子，红曲菌菌种经过高速离心处理后被分离，对红曲菌菌体进行负极磁化后将会带有负电离子，处理后使两相邻载体间带有不同种的电荷，红曲菌菌种对载体的固定吸附作用增强；

步骤4：亳菊酵素的获取

将亳菊汁、纯净水、蔗糖和乳清蛋白粉装入酵素瓶，150～160℃下灭菌5～10秒后取出，静置5～8小时；添加步骤3处理后的红曲菌，30～37℃、120-180r/min下摇床发酵10～15天，将所得发酵液过滤，即得红曲亳菊酵素原液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤1中，选取含酚量3.0～4.0％的亳菊作为原料。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤2中，所述PDA斜面培养基是通过如下方法制备获得：

称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸0.1～0.5h，纱布过滤，再加15g～20g葡萄糖和15～20g琼脂充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管5～10ml，121℃灭菌15～20分钟后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤2中，所述液体培养基的配方如下：葡萄糖15～25份，蛋白胨5～15份，酵母粉2～5份，氯化钾0.3～0.7份，七水合硫酸镁0.01～0.03份，磷酸二氢钾3～6份，pH自然；120～125℃灭菌15～20分钟。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤3a中，所述载体包括丝瓜络、芦苇叶或玉米芯。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤3a中，过筛孔径为150～350μm。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤3b中，高速离心的转速控制在12000～15000r/min。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤4中，各原料的添加量按质量份数构成为：亳菊汁50～80份，纯净水20～40份，蔗糖20～50份，乳清蛋白粉20～50份。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤4中，每10ml发酵液添加1ml红曲菌种子液。