[发明专利]用于肿瘤免疫治疗的融合细胞膜纳米囊泡、其制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种用于肿瘤免疫治疗的融合细胞膜纳米囊泡、其制备方法及应用。其中，该融合细胞膜纳米囊泡由两种或两种以上来自不同来源细胞的细胞膜囊泡融合而成，来自不同来源细胞的细胞膜囊泡过表达了不同的免疫检查点对应的受体。本发明的融合细胞膜囊泡不需要复杂的设计和制备，不会带来免疫毒性；不仅相对于具有单一靶向标记的细胞膜囊泡来说改善了治疗效果，而且相对于简单混合使用具有不同靶向标记的细胞膜囊泡的鸡尾酒疗法来说，也改善了治疗效果；另外，融合细胞膜囊泡中的单细胞膜囊泡组件可以单独定制，使得结构具有高自由度，可选择靶向多种不同的肿瘤细胞；又由于肿瘤细胞膜的同源靶向性与免疫抗原，可同时提高多种肿瘤的治疗效果。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体而言，涉及一种用于肿瘤免疫治疗的融合细胞膜纳米囊泡、其制备方法及应用。

背景技术

免疫检查点阻断疗法(ICB疗法)属于肿瘤免疫疗法。其中，免疫阻断点包括适应性和先天性的免疫阻断点，比如PD-L1和CD47。作为一种适应性的免疫阻断点，PD-L1可以抑制抗肿瘤T细胞的活性和通过PD-1受体来减少抗肿瘤适应性的免疫响应，因此，PD-L1/PD-1信号通路的中断可以恢复抗肿瘤T细胞的免疫响应。作为一种先天的免疫阻断点，CD47可以通过与它的受体(信号调控蛋白SIRPα)相互作用减少巨噬细胞的吞噬作用。因此，阻断CD47和SIRPα信号通路也可以抑制肿瘤的生长。

由于PD-L1和CD47都可以在肿瘤细胞上过表达，分别充当至关重要的适应性和先天的阻断点，它们是否在免疫调控方面具有协同作用变得非常有吸引力。但同时也存在着一定的技术问题，例如：FU Y X，LIU X J.Dual targeting of innate and adaptivecheckpoints on tumor cells limits immune evasion[J].Cancer Research,2018,78(13).公开了一种融合蛋白，可以同时阻断PD-L1和CD47，展示了相对于单一阻断点更好的治疗效果。但是融合蛋白技术需要复杂的设计和隔离，并且不具有肿瘤靶向性，还会带来蛋白毒性。又如，ZHANG X D，WANG C，WANG J Q，et al.PD-1Blockade Cellular Vesiclesfor Cancer Immunotherapy[J].Advanced Materials,2018,30(22).公开了在过表达PD-1的单一细胞膜囊泡用于肿瘤的免疫治疗。但是这种方法对于同时表达有PD-L1和CD47的肿瘤细胞来说，只阻断PD-L1/PD-1信号通路，其治疗效果并不好。

发明内容

本发明旨在提供一种用于肿瘤免疫治疗的融合细胞膜纳米囊泡、其制备方法及应用，以改善肿瘤免疫治疗的效果。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种用于肿瘤免疫治疗的融合细胞膜纳米囊泡。该融合细胞膜纳米囊泡由两种或两种以上来自不同来源细胞的细胞膜囊泡融合而成，来自不同来源细胞的细胞膜囊泡过表达了不同的免疫检查点对应的受体。

进一步地，免疫检查点对应的受体包括SIRPα变体、PD-1、CLTA-4、TIM3、LAG3和VISTA。

进一步地，不同来源细胞包括过表达SIRPα变体的4T1细胞和过表达PD-1的B16F10细胞。

根据本发明的另一个方面，提供一种上述融合细胞膜纳米囊泡的制备方法。该制备方法包括以下步骤：选取两种或两种以上的肿瘤细胞的免疫检查点，通过对细胞进行基因工程化得到过表达免疫检查点对应的受体的细胞，其中，过表达免疫检查点对应的受体的细胞为两种或两种以上，每种过表达免疫检查点对应的受体的细胞过表达一种或多种免疫检查点对应的受体；分别制备衍生于过表达免疫检查点对应的受体的细胞的单一细胞膜囊泡组分；以及融合两种或两种以上单一细胞膜囊泡组分，得到融合细胞膜纳米囊泡。