[发明专利]检测并鉴定3种食源性致病菌的多重荧光定量PCR方法在审
| 申请号： | 202110931366.0 | 申请日： | 2021-08-13 |
| 公开（公告）号： | CN113621720A | 公开（公告）日： | 2021-11-09 |
| 发明（设计）人： | 李杰峰;张宁;杨威;赵志强;李茜;王珏;王华健;陆安;田勇 | 申请（专利权）人： | 河北省畜牧兽医研究所;河北金元康药业有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/19;C12R1/42;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京盛询知识产权代理有限公司 11901 | 代理人： | 张海青 |
| 地址： | 071000 河北*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 鉴定 种食源性 致病菌 多重 荧光 定量 pcr 方法 | ||
1.用于检测并鉴定3种食源性致病菌的多重荧光定量PCR扩增引物和探针，其特征在于，包括如下序列：
扩增大肠杆菌O157:H7 rfbE基因的如SEQ ID NO：1-2所示的引物对和SEQ ID NO：3所示的探针；
扩增沙门氏菌invA基因的如SEQ ID NO：4-5所示的引物对和SEQ ID NO：6所示的探针；以及
扩增单增李斯特菌hlyA基因的如SEQ ID NO：7-8所示的引物对和SEQ ID NO：9所示的探针；
上述SEQ ID NO：1-9所示序列在一次检测中共同使用。
2.一种用于检测并鉴定3种食源性致病菌的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物和探针。
3.一种检测并鉴定3种食源性致病菌的多重荧光定量PCR方法，其特征在于，包括利用权利要求1所述的引物和探针扩增待测样品目标菌株DNA的步骤。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，扩增反应体系包括以下组分：2×M5GoldStarTaqMan Mixture 30μL，3种细菌上下游引物1.5μL，混合探针0.6μL，DNA模板4μL，ddH2O补足至50μL。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，反应程序为：95℃预变性15min；95℃变性3s，60℃退火并延伸30s，40个循环，在每个循环的退火延伸阶段收集荧光信号。
6.一种如权利要求1所述的引物和探针或权利要求2所述的试剂盒或权利要求3-5任一项所述的方法在检测并鉴定食源性致病菌中的应用。
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