[发明专利]注射衣霉素诱导急性肝损伤小鼠模型的构建方法

说明书

本发明公开了注射衣霉素诱导急性肝损伤小鼠模型的构建方法，将配置好的浓度为0.1μg/μl衣霉素(TM)溶液通过腹腔注射的给药方式注射到小鼠体内，12h后采用颈椎脱臼方法处死小鼠并收集血液、肝脏组织进行形态、病理及生化指标分析。该方法不仅操作简便、建模周期短、建模成功率高、生物利用率高，而且为建立急性肝损伤模型小鼠提供了新思路，同时为研究肝损伤及病情进展的发病机制提供实验工具，为临床肝病的预防、治疗提供理论基础。

技术领域

本发明属于动物模型构建技术领域，具体涉及一种腹腔注射诱导急性肝损伤小鼠模型的构建方法。

背景技术

肝病是威胁健康的重大疾病之一，其患病率和致死率均很高。长期服用药物、患有炎症性肝病(如病毒性肝炎、脂肪型肝炎或酒精性肝炎)、生活饮食习惯不健康(长期的熬夜、酗酒、工作压力大)等原因都会造成一定程度的肝损伤，长期的肝损伤得不到有效治疗便会发展为肝硬化、肝癌甚至死亡。而小鼠作为常规的实验动物，因此建立急性肝损伤的小鼠模型在肝病致病机理研究及药物研发中非常重要。

目前常用的急性肝损伤小鼠模型有四氯化碳(CCl4)、α-萘异硫氰酸酯(ANIT)、3，5-二乙氧基羰基-1，4-二氢-2，4，6-三甲基吡啶 (DDC)、脂多糖(LPS)/D-氨基半乳糖(D-GaLN)、对乙酰氨基酚(APAP) 等诱发的肝损伤模型。不同急性肝损伤动物模型有不同的生化及肝脏病理特点，每一种动物模型都有其优势与不足，尚没有完全理想的急性肝损伤动物模型。另外，现有技术中公开了一种新型的内质网应激型肝损伤小鼠造模方法，例如公开号CN103735561A的专利公开了采用衣霉素二甲基亚砜溶液作为内质网应激诱导剂给小鼠灌胃，所述方法虽然能在给药8～48h后诱导急性肝损伤的发生，但是该方法采用的是灌胃给药的方法，内质网应激诱导剂经胃肠道吸收，会存在胃肠道首过代谢从而导致生物利用率降低的现象。

发明内容

本发明目的在于提供一种新型的腹腔注射衣霉素溶液从而诱导急性肝损伤小鼠模型的构建方法，所述方法不仅操作简便、建模周期短、建模成功率高，而且小鼠生物利用率高。技术方案包括以下步骤：

1、衣霉素溶液的配制；

①150mM葡萄糖溶液的配制：精密称取810.72mg葡萄糖溶于30ml 灭菌水中，震荡溶解。

②0.1μg/μl衣霉素(TM)溶液的配制：精密称取1mg衣霉素粉末溶解于100μl二甲亚砜(DMSO)中，再加入10ml的150mM葡萄糖溶液，震荡溶解，4℃保存。

③1％DMSO对照液的配制：取100μl二甲亚砜(DMSO)溶液加入到10ml的150mM葡萄糖溶液，震荡溶解，4℃保存。

④将7周龄C57BL/6小鼠按体重大小随机分成对照组和实验组两组，每组12只，实验组开始腹腔注射步骤②中配制的TM溶液(100μl/10g)，与此同时对照组腹腔注射步骤③中配制的 1％DMSO对照液(100μl/10g)，12h后处死取材。

⑤观察肝脏形态、病理图并检测肝损伤相关的生化指标。

有益效果

本发明是腹腔注射衣霉素溶液从而诱导急性肝损伤小鼠模型的构建方法，由于采用的是腹腔注射的方法，该方法较好的避免了胃肠道首过代谢现象，从而达到用较低剂量的衣霉素(1μg/g)、且在短周期内(12h)即可完成急性肝损伤模型的建立，为建立急性肝损伤小鼠模型提供了新思路，同时为研究肝损伤及病情进展的发病机制提供实验工具，为临床肝病的预防、治疗提供理论基础。

具体实施方式

本发明是腹腔注射衣霉素溶液从而诱导急性肝损伤小鼠模型的构建方法，具体实施方式包括：

①溶液的配制：

150mM葡萄糖溶液的配制：用分析天平精密称取810.72mg葡萄糖粉末于50ml无菌EP管里，并向EP管加入30ml灭菌水，震荡溶解。