[发明专利]猪流行性腹泻病毒株、灭活疫苗、抗体及抗体的制备方法

权利要求书

1.一种猪流行性腹泻病毒株，其特征在于，所述病毒株命名为猪流行性腹泻病毒SDLC株，于2021年4月13日保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：V202141。

2.一种猪流行性腹泻病毒灭活疫苗，其特征在于，所述猪流行性腹泻病毒灭活疫苗利用如权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒SDLC株作为灭活抗原制备得到，用于制备疫苗的病毒液的病毒含量≥10^7.5TCID₅₀/0.1ml。

3.一种预防和治疗仔猪流行性腹泻的抗体，其特征在于，所述抗体利用权利要求2所述的猪流行性腹泻病毒灭活疫苗免疫产奶的牛或羊，并通过收集免疫后的牛奶或羊奶进行抗体提取进而获得抗体。

4.一种如权利要求3所述的预防和治疗仔猪流行性腹泻抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

（1）采用权利要求2所述的猪流行性腹泻病毒灭活疫苗免疫产奶的牛或羊，免疫后，收集羊奶或牛奶；

（2）调节羊奶或牛奶的pH至4.0-4.2，离心去除羊奶或牛奶中的酪蛋白；

（3）向去除酪蛋白的羊奶或牛奶中加入碱调节pH至6.2-6.5后，加热至50-70℃，离心去除乳脂；

（4）将去除乳脂的羊奶或牛奶加热至60-70℃，保温灭活10-20分钟，灭活结束后，水浴冷却至30℃以下；

（5）向步骤（4）中冷却的羊奶或牛奶中加入甲醛溶液至甲醛的终浓度为0.5‰，充分搅拌混匀，密封50-80分钟；

（6）步骤（5）获取的溶液经深滤、超滤及除菌过滤后即获得预防和治疗仔猪流行性腹泻抗体。

5.根据权利要求4所述的预防和治疗仔猪流行性腹泻抗体的制备方法，其特征在于，步骤（1）中猪流行性腹泻病毒灭活疫苗免疫产奶的羊，收集羊奶的具体步骤为：

基础免疫，每只羊颈背部肌肉注射疫苗0.8ml；

二次免疫，在基础免疫后14日进行第2次接种，每只羊颈背部肌肉注射1.0ml；

三次免疫，在二次免疫后14日进行第3次接种，每只羊颈背部肌肉注射1.5ml；

维持免疫，当羊奶中猪流行性腹泻抗体中和效价达到1:512时，维持接种1次，每只羊颈背部肌肉注射疫苗1.5ml；

收集羊奶，三次强化免疫后14日，开始收集羊奶，提取抗体，羊奶中猪流行性腹泻抗体的中和效价≥1:512为合格，羊奶置-20℃冻存。

6.根据权利要求4所述的预防和治疗仔猪流行性腹泻抗体的制备方法，其特征在于，步骤（1）中猪流行性腹泻病毒灭活疫苗免疫产奶的牛，收集牛奶的具体步骤为：

基础免疫，每只奶牛颈背部肌肉注射疫苗1.5ml；

二次免疫，在基础免疫后14日进行第2次接种，每只奶牛颈背部肌肉注射2.0ml；

三次免疫，在二次免疫后14日进行第3次接种，每只奶牛颈背部肌肉注射2.5ml；

维持免疫，当牛奶中猪流行性腹泻抗体中和效价达到1:1024时，维持接种1次，每只奶牛颈背部肌肉注射疫苗2.5ml；

收集牛奶，三次强化免疫后14日，开始收集牛奶，提取抗体，牛奶中猪流行性腹泻抗体的中和效价≥1:1024为合格，牛奶置-20℃冻存。

7.根据权利要求4所述的预防和治疗仔猪流行性腹泻抗体的制备方法，其特征在于，收集完羊奶或牛奶后将收集羊奶或牛奶置-20℃冻存，在步骤（2）调节pH之前将冻存的羊奶或牛奶提前一天取出放至融化池进行融化，第二天将融化的羊奶或牛奶倒入灭菌后的容器中，边搅拌边添加盐酸溶液调节pH值至4.0-4.2，检测pH值稳定后，利用离心机离心去除牛奶中的酪蛋白，收集离心后的羊奶或牛奶到另一个容器中。

8.根据权利要求4所述的预防和治疗仔猪流行性腹泻抗体的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，向去除酪蛋白的羊奶或牛奶中边搅拌边添加氢氧化钠溶液，调节pH至6.2-6.5，之后边搅拌边加热羊奶或牛奶至60℃，将60℃的羊奶或牛奶离心去除乳脂。

9.根据权利要求4所述的预防和治疗仔猪流行性腹泻抗体的制备方法，其特征在于，步骤（6）中对步骤（5）获取的溶液采用K型多层板框过滤澄清，用截留分子量为1000KD的超滤膜过滤除病毒，将调配合格的抗体用0.22um微孔滤膜进行过滤除菌。