[发明专利]猪流行性腹泻病毒株、灭活疫苗、抗体及抗体的制备方法

说明书

本发明公开一种猪流行性腹泻病毒株、灭活疫苗、抗体及抗体的制备方法，所述病毒株命名为猪流行性腹泻病毒SDLC株，所述灭活疫苗利用猪流行性腹泻病毒SDLC株作为灭活抗原制备得到，所述抗体利用猪流行性腹泻病毒灭活疫苗免疫产奶的牛或羊，并通过收集免疫后的牛奶或羊奶进行抗体提取进而获得抗体。本发明提出的猪流行性腹泻病毒株为猪流行性腹泻病毒的流行株，其毒性较一般的猪流行性腹泻病毒的毒性大，但用其制备的猪流行性腹泻病毒抗原的安全性良好，未出现由疫苗引起的任何局部和全身不良反应，适用于制备抗原且制备的抗体能够取得较好的效果。

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体地说涉及一种猪流行性腹泻病毒株、灭活疫苗、抗体及抗体的制备方法。

背景技术

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea，PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)引起的一种急性、高度接触性消化道传染病，以呕吐、严重的腹泻、脱水为主要临床症状。该病在我国多发生于冬季，并且经常同其他疾病混合发生，所有品种和年龄的猪对此病毒都易感，新生哺乳仔猪尤为严重，发病和死亡率最高可达100％，随着日龄的增大死亡率逐渐下降，育肥猪以及成年猪多表现为腹泻或隐性感染。

我国PEDV主要分为两个大群，经典毒株群(G1型)和新型毒株群(G2型)，其中经典毒株主要指以CV777为代表的疫苗株和传统临床毒株，目前现地流行毒株大部分为新型PEDV毒株。国内市场已经商品化的PED疫苗都是联苗，主要是猪传染性胃肠炎(TGEV)与PEDV的二联灭活苗或者二联弱毒苗及PEDV、TGEV和猪轮状病毒三联灭活疫苗。尽管PEDV弱毒疫苗和灭活疫苗以及病料返饲对PED的防控起到了一定作用，但疫苗免疫失败的现象屡屡发生。针对PED目前尚无有效治疗的药物，常规治疗效果不佳，尤其是哺乳母猪发病，会引起PED在猪场流行。因此，研发出能有效预防和治疗仔猪腹泻，降低仔猪流行性腹泻的发病率，减少养殖户的经济损失是当务之急。

发明内容

针对现有技术的种种不足，为了解决上述问题，现提出一种猪流行性腹泻病毒株、灭活疫苗、抗体及抗体的制备方法。为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种猪流行性腹泻病毒株，所述病毒株命名为猪流行性腹泻病毒SDLC株，于2021年5月14日保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：V202141。

一种猪流行性腹泻病毒灭活疫苗，所述猪流行性腹泻病毒灭活疫苗利用如上所述的猪流行性腹泻病毒SDLC株作为灭活抗原制备得到，用于制备疫苗的病毒液的病毒含量≥10^7.5TCID₅₀/0.1ml。

一种预防和治疗仔猪流行性腹泻的抗体，所述抗体利用上述的猪流行性腹泻病毒灭活疫苗免疫产奶的牛或羊，并通过收集免疫后的牛奶或羊奶进行抗体提取进而获得抗体。

一种预防和治疗仔猪流行性腹泻抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

(1)采用上述猪流行性腹泻病毒灭活疫苗免疫产奶的牛或羊，免疫后，收集羊奶或牛奶；

(2)调节羊奶或牛奶的pH至4.0-4.2，离心去除羊奶或牛奶中的酪蛋白；

(3)向去除酪蛋白的羊奶或牛奶中加入碱液调节pH至6.2-6.5后，加热至50-70℃，离心去除乳脂；

(4)将去除乳脂的羊奶或牛奶加热至60-70℃，保温灭活10-20分钟，灭活结束后，水浴冷却至30℃以下；

(5)向步骤(4)中冷却的羊奶或牛奶中加入甲醛溶液至甲醛的终浓度为0.5‰，充分搅拌混匀，密封50-80分钟；

(6)步骤(5)获取的溶液经深滤、超滤及除菌过滤后即获得预防和治疗仔猪流行性腹泻抗体。