[发明专利]一种检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法有效
| 申请号： | 202110936566.5 | 申请日： | 2021-08-16 |
| 公开（公告）号： | CN113670841B | 公开（公告）日： | 2023-03-10 |
| 发明（设计）人： | 姜振林;刘育宏;吴忠仕;唐贞洁;刘四喜;解鑫隆;卢婷;袁浩泳 | 申请（专利权）人： | 中南大学湘雅二医院 |
| 主分类号： | G01N21/31 | 分类号： | G01N21/31 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 潘颖 |
| 地址： | 410000 湖南*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 生物 瓣膜 材料 残余 方法 | ||
1.一种检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法，其特征在于，包括如下步骤：
将戊二醛交联处理后的生物瓣膜材料漂洗，研磨成粉，加入PBS缓冲液研磨成匀浆；
在所述匀浆中加入PBS缓冲液、NAD+溶液、乙醛脱氢酶溶液，在20~30℃温度下反应0.5~1.5h；所述NAD+溶液、乙醛脱氢酶溶液的溶剂为含有2.5~3.5mol/L KCl、pH8.0~9.0的80~120mmol/L Tris-HCl缓冲液；
以g/μmol/U计，生物瓣膜材料、NAD+、乙醛脱氢酶的用量比为(1~1.5):（1.5~2）：（1.5~2）；
将所得反应液离心，检测上清液的340nm处吸光值，根据戊二醛的标准曲线得到残余醛基的浓度。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述漂洗的时间为5~10d。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述研磨成粉为采用液氮研磨成粉。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，以g/umol/U计，生物瓣膜材料、NAD+、乙醛脱氢酶的用量比为 1.15 ：1.875 ：1.5。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙醛脱氢酶溶液的浓度为2~6U/L，所述NAD+溶液的浓度为1~5mmol/L。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述NAD+溶液、乙醛脱氢酶溶液的溶剂为含有3mol/L KCl、pH8.5的100mmol/L Tris-HCl缓冲液。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应的条件为：在25℃温度下反应1h。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述离心为：在10000~15000转/分的转速下离心5~8min。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其特征在于，所述生物瓣膜材料为牛心包、猪主动脉瓣膜、牛颈静脉带瓣管道中的一种。
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