[发明专利]麦长管蚜杀虫剂或抗生素处理下稳定表达内参基因SA-28S部分序列、克隆方法及应用在审
| 申请号： | 202110939534.0 | 申请日： | 2019-07-08 |
| 公开（公告）号： | CN113832157A | 公开（公告）日： | 2021-12-24 |
| 发明（设计）人： | 朱勋;张云慧;高海峰;李祥瑞;阎维巍;程登发;李新安;任智萌;龚培盼;王超;魏长平;杨超霞;李亚萍;殷新田 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/10;C12Q1/6851;C12Q1/6888 |
| 代理公司： | 北京知本村知识产权代理事务所(普通合伙) 11039 | 代理人： | 刘江良 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 麦长管蚜 杀虫剂 抗生素 处理 稳定 表达 内参 基因 sa 28 部分 序列 克隆 方法 应用 | ||
1.一种麦长管蚜基因片段，其特征在于，所述基因片为SA-28S基因片段，其核苷酸序列如SEQ ID No.16所示。
2.一种麦长管蚜基因部分序列的克隆方法，其特征在于，步骤如下：：提取麦长管蚜基因组总RNA，以试剂盒自带混合引物为反应引物进行RT反应，以产物第一链cDNA作为模板、以引物SA-28S-F/SA-28S-R进行RT-PCR扩增，得到阳性克隆，最后经测序验证，其中所述引物对序列如下：
SA-28S-F：5’-CGAGTGAGCCAGAAACACAT-3’ ；
SA-28S-R：5’-ATCCCCAGTCTTTGGCCTTTT-3’。
3.根据权利要求2所述的克隆方法，所述PCR扩增的反应条件如下：
94℃预变性5min后；94℃变性30sec，60℃退火30sec，每个循环降0.5℃，72℃延伸1mim，共30个循环；94℃再变性30sec，45℃再退火30sec， 72℃再延伸1mim，共10个循环；最后于72℃补平7min，终止温度为8℃。
4.一种qPCR扩增麦长管蚜基因部分序列的方法，其特征在于，步骤如下：提取麦长管蚜基因组总RNA，以试剂盒自带混合引物为反应引物进行RT反应，以产物第一链cDNA作为模板进行荧光定量PCR扩增，荧光染料为SYBR Green 1，其中定量PCR扩增中的麦长管蚜的定量引物，其序列为：
QSA-28S-F：5’-TCTATCAACCGGCAACCACA-3’ ；
QSA-28S-R：5’-TGGCGAATCTCGTTGCATTT-3’。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述荧光定量PCR扩增的反应条件如下：
95℃预变性15min后；先运行40个循环的95℃变性10sec，60℃退火32sec，再运行溶解曲线阶段的95℃ 15sec，60℃ 1min，95℃ 30sec，60℃ 15sec。
6.权利要求1所述的麦长管蚜基因片段作为内参基因的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其中，SA-28S基因片段用于麦长管蚜功能基因或不同发育时期基因表达，或者有翅蚜或无翅蚜体内基因表达的定量PCR检测。
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