[发明专利]一种类泛素蛋白蛋白酶的生产方法

权利要求书

1.一种SUMO蛋白酶的生产方法，其特征在于按照下述步骤进行：

1)构建SUMO蛋白酶表达载体；

2)将所述SUMO蛋白酶表达载体转化至宿主菌，筛选获得基因工程菌；

3)对所述基因工程菌进行培养，从培养液中提取SUMO蛋白酶；

步骤1)中，所述SUMO蛋白酶表达载体为pET30a-stag-Bsulpstar；

步骤2)中，所述宿主菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)；

进一步地，步骤2)包括：

将质粒pET30a-stag-Bsulpstar与感受态细胞混匀，随后进行冰浴、水浴热击、冰浴，再于培养基中进行复苏培养；

将复苏培养后的培养液涂布于含有卡那青霉素和氯霉素的固体培养基中进行培养，培养后挑取单克隆并筛选阳性转化子，获得基因工程菌。

2.根据权利要求1所述的一种SUMO蛋白酶的生产方法，其特征在于，所述固体培养基中卡那青霉素的浓度为45-55μg/mL，氯霉素的浓度为30-40μg/mL。

3.根据权利要求1所述的一种SUMO蛋白酶的生产方法，其特征在于，步骤3)中，采用发酵培养基进行培养，其中每升发酵培养基中含有蛋白胨18-22g，酵母提取物8-12g，Na₂HPO₄·7H₂O 6-7g，KH₂PO₄ 3-4g，NH₄Cl 2-3g，Na₂SO₄ 0.5-1.0g，MgSO₄ 0.4-0.6g，甘油4-6mL，葡萄糖0.4-0.6g，乳糖1.8-2.2g，FeCl₃ 0.001-0.005g。

4.根据权利要求1所述的一种SUMO蛋白酶的生产方法，其特征在于，步骤3)中，所述培养的条件如下：接种量为0.5-1.5％，培养温度为28-32℃，搅拌速度200-240rpm，培养时间为18-22h。

5.根据权利要求1所述的一种SUMO蛋白酶的生产方法，其特征在于，步骤3)中，从培养液中提取SUMO蛋白酶包括：

从培养液中收集菌体，将菌体悬于裂解缓冲液中，于冰浴中超声裂解细胞；其中，超声裂解细胞的条件如下：功率为25％，超声2-3秒后停3-5秒作为一个循环，共进行340-360个循环；

对裂解液进行离心，采用微孔滤膜对离心上清液进行过滤，得到粗酶液；

进一步地，SUMO蛋白酶的生产方法，还包括对所述粗酶液进行提纯；

具体地，所述提纯包括：

采用镍柱对所述粗酶液进行柱层析；

对所述柱层析的流出液进行透析。

6.一种SUMO蛋白酶的菌株，保藏编号为CGMCC No.22263，建议的分类命名为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。