[发明专利]一种检测番茄褐色皱果病毒的胶体金免疫试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一组杂交瘤细胞株，其特征在于，包括：分泌番茄褐色皱果病毒单抗杂交瘤细胞株FL447-14和分泌番茄褐色皱果病毒单抗杂交瘤细胞株FL447-16；所述分泌番茄褐色皱果病毒单抗杂交瘤细胞株FL447-14的保藏编号为CCTCC NO：C 2021207；所述分泌番茄褐色皱果病毒单抗杂交瘤细胞株FL447-16的保藏编号为CCTCC NO：C 2021208。

2. 单克隆抗体组合，其特征在于，所述单克隆抗体组合包括：单克隆抗体FL447-14和单克隆抗体FL447-16；所述单克隆抗体FL447-14由保藏编号为CCTCC NO：C 2021207的杂交瘤细胞株分泌产生，所述单克隆抗体FL447-16由保藏编号为CCTCC NO：C 2021208的杂交瘤细胞株分泌产生。

3.权利要求1所述的杂交瘤细胞株或权利要求2所述的单克隆抗体组合在制备检测番茄褐色皱果病毒的产品中的应用。

4.一种检测番茄褐色皱果病毒的胶体金免疫试纸条，其特征在于，所述胶体金免疫试纸条包括底板，依次搭接固定于底板上的样品垫、免疫胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸；

所述免疫胶体金垫是结合有胶体金颗粒标记单克隆抗体FL447-14的金标垫；

所述硝酸纤维素膜上沿样品流动方向依次设有检测线和质控线，所述检测线包被单克隆抗体FL447-16，所述质控线包被羊抗鼠IgG抗体；

所述单克隆抗体FL447-14由保藏编号为CCTCC NO：C 2021207的杂交瘤细胞株分泌产生；所述单克隆抗体FL447-16由保藏编号为CCTCC NO：C 2021208的杂交瘤细胞株分泌产生。

5.根据权利要求4所述的胶体金免疫试纸条，其特征在于，所述检测线与质控线之间相距6-6.5mm。

6.权利要求4或5所述的胶体金免疫试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）调节胶体金溶液的pH为6.0-6.5，向胶体金溶液中加入单克隆抗体FL447-14，使单克隆抗体FL447-14的终浓度为18-22μg/ml；混合均匀，室温反应35-45min，加入BSA溶液终止反应，静置20-40min，低速离心弃去凝聚的金胶粒沉淀，然后高速离心，弃去上清，沉淀物用金标液复溶，制成含有胶体金颗粒标记单克隆抗体FL447-14的免疫胶体金溶液；

（2）将步骤（1）制备的免疫胶体金溶液涂在金标垫上，得到免疫胶体金垫；

（3）将单克隆抗体FL447-16和羊抗鼠IgG抗体分别点射于硝酸纤维素膜上，形成含有检测线和质控线的硝酸纤维素膜；

（4）在底板上依次搭接固定样品垫、免疫胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸，即制备得到胶体金免疫试纸条。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述胶体金溶液按照如下方法制备：

将1%氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入新制备的1%枸橼酸钠溶液，继续搅拌加热至溶液出现红色，继续煮沸出现透明的橙红色，保持沸煮7-10min，自然冷却至室温。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述胶体金溶液中的胶体金的粒径为40 nm。

9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，免疫胶体金溶液涂在金标垫上的涂覆量为2.5 μl /cm²。

10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，单克隆抗体FL447-16和羊抗鼠IgG抗体均稀释至1mg/ml，用量均为0.7 μl/cm；然后点射于硝酸纤维素膜上，分别形成检测线和质控线。