[发明专利]一种重组工程菌及其用于高效转化L-泛解酸内酯的应用

权利要求书

1.一种重组载体，所述重组载体选自含有L-泛解酸内酯脱氢酶的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示、酮泛解酸内酯还原酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示和甲酸脱氢酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的重组载体。

2.根据权利要求1所述的重组载体，其中，所述重组载体任选地包括第四重组载体、第五重组载体的任一种，其中，第四重组载体包含酮泛解酸内酯还原酶的核苷酸序列如SEQID NO.2所示和甲酸脱氢酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，第五重组载体包含L-泛解酸内酯脱氢酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示、酮泛解酸内酯还原酶的核苷酸序列如SEQID NO.2所示和甲酸脱氢酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.一种重组工程菌，所述重组工程菌包括能够表达L-泛解酸内酯脱氢酶的第一重组载体、表达酮泛解酸内酯还原酶的第二重组载体和表达甲酸脱氢酶的第三重组载体的任一种或其组合；

和/或，所述重组工程菌包括能够共表达酮泛解酸内酯还原酶和甲酸脱氢酶的第四重组载体；

和/或，所述重组工程菌包括能够共表达L-泛解酸内酯脱氢酶、酮泛解酸内酯还原酶和甲酸脱氢酶的第五重组载体。

4.根据权利要求3所述的重组工程菌，其中，所述重组工程菌包含能够表达L-泛解酸内酯脱氢酶的第一重组载体、共表达酮泛解酸内酯还原酶和甲酸脱氢酶的第四重组载体。

5.一种重组工程菌的构建方法，包括下述步骤：

(1)将L-泛解酸内酯脱氢酶编码基因、酮泛解酸内酯还原酶编码基因、甲酸脱氢酶编码基因的任一种或其组合顺序或同步导入载体，得到重组载体；

(2)将所得重组载体导入宿主细胞，得到重组工程菌。

6.一种DL-泛解酸内酯的制备方法，包括如下步骤：将浓度为10-300g/L的L-泛解酸内酯置于浓度为1-100g/L的甲酸铵、菌体OD值为1-5的重组工程菌的发酵体系中，将其置于30-40℃、pH4-7条件下培养发酵20-40h，制得DL-泛解酸内酯。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其中，L-泛解酸内酯的浓度为100-250g/L，优选为150-200g/L。

8.根据权利要求6-7任一项所述的制备方法，其中，甲酸铵的浓度为20-80g/L，优选为30-50g/L。

9.根据权利要求6-8任一项所述的制备方法，其中，反应体系中还可加入金属盐或磷酸盐溶液；优选的，所述金属盐或磷酸盐选自锌盐、钙盐、铜盐、镁盐、钠盐、钾盐中的任一种或其组合，优选为氯化镁、氯化锌、氯化钙、氯化铜、氯化钠、氯化钾、硫酸钠、硫酸氢钠、硫酸氢钾、硫酸钾、硫酸镁、硫酸锌、硫酸钙、硫酸铜、磷酸镁、磷酸锌、磷酸钙、磷酸铜、磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢钙、磷酸钙、焦磷酸钙、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、酸式焦磷酸钠、磷酸钠、焦磷酸钠中的任一种或其组合。

10.根据权利要求3-4任一项所述的重组工程菌在L-泛解酸内酯制备DL-泛解酸内酯中的应用。