[发明专利]一种抗衰祛皱的酵母提取物的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种抗衰祛皱的酵母提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

(1)制备用于生产酵母提取物的酿酒酵母，发酵培养得到发酵液；

其中，所述用于生产酵母提取物的酿酒酵母通过肝素亲和试验、弹性蛋白酶活性抑制试验、人成纤维细胞活性实验或胶原蛋白生成试验中的任意一种或至少两种试验筛选得到；

(2)所述发酵液经过分子筛纯化和肝素亲和层析纯化，得到所述抗衰祛皱的酵母提取物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述肝素亲和试验的操作包括：

先用平衡液平衡3～4V柱床，上样，冲洗杂蛋白；而后，以洗脱液洗脱所述柱床上的蛋白，收集所述蛋白并得到所述蛋白的总量，依据蛋白总量筛选所述酿酒酵母；

优选地，步骤(1)所述弹性蛋白酶活性抑制试验的操作包括：

将弹性蛋白底物和酿酒酵母的发酵液上清混合，再加入弹性蛋白酶，孵育后检测，得到所述弹性蛋白酶的活性和所述酿酒酵母的弹性蛋白酶活性抑制率；

优选地，步骤(1)所述人成纤维细胞活性实验采用MTT法进行；

优选地，步骤(1)所述胶原蛋白生成试验采用酶联免疫Elisa试剂盒进行。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述用于生产酵母提取物的酿酒酵母的制备方法包括：

先将工业酿酒酵母菌种活化、发酵培养，再采用ARTP系统进行微生物育种；

所述育种完成后，使用肝素亲和试验对所得菌株进行初筛；

而后，采用弹性蛋白酶活性抑制试验、人成纤维细胞活性实验或胶原蛋白生成试验中的任意一种或至少两种对初筛后得到的菌株进行复筛，得到所述用于生产酵母提取物的酿酒酵母；

优选地，所述ARTP系统进行微生物育种的处理条件为：

氦气流速5～35L/min、输入功率100～120W、照射距离1～3mm、处理温度低于40℃、时间30～180s。

4.根据权利要求1～3任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述分子筛纯化采用的分子筛包括Superdex^TM30prep grade；

优选地，所述分子筛纯化采用的冲洗液包括PB缓冲液；

优选地，所述冲洗液的温度为15～19℃；

优选地，所述冲洗液的pH值为6.5～7.2；

优选地，所述冲洗液的电导为1800μs/cm～2ms/cm。

5.根据权利要求1～4任一项所述的制备方法，其特征在于，所述肝素亲和层析纯化采用分梯度的方法进行洗脱；

优选地，所述肝素亲和层析纯化采用的洗脱液包括含有1.2～1.5mol/L NaCL的PB缓冲液；

优选地，所述洗脱液的温度为15～19℃；

优选地，所述洗脱液的pH值为6.2～6.3；

优选地，所述洗脱液的电导为75～95ms/cm。

6.根据权利要求1～5任一项所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括对所述抗衰祛皱的酵母提取物进行检测的步骤；

优选地，所述用于生产酵母提取物的酿酒酵母采用如下方法进行保藏：

采用细胞冻存管接入超过对数生长期的所述酿酒酵母，并用甘油蒸馏水溶液制成菌悬液，以每分钟下降1～2℃的速度冻结至-20℃，经冻结至-20℃的细胞冻存管放入液氮冷冻保藏器；

优选地，所述用于生产酵母提取物的酿酒酵母采用如下方法进行活化：

将所述细胞冻存管取出，放入38～40℃的水浴中进行解冻，直到全部融化为止，打开所述细胞冻存管，将内容物移入培养基上进行培养；

优选地，所述酿酒酵母每隔5年解冻、活化，重新保藏。

7.一种利用如权利要求1～6任一项所述的制备方法制备得到的酵母提取物。