[发明专利]重组人源胶原蛋白及其人造角膜有效
申请号: | 202110950169.3 | 申请日: | 2021-08-18 |
公开(公告)号: | CN113637067B | 公开(公告)日: | 2022-10-18 |
发明(设计)人: | 杨洋;杨树林;王子勋;朱帅 | 申请(专利权)人: | 南京艾澜德生物科技有限公司 |
主分类号: | C07K14/78 | 分类号: | C07K14/78;C12N15/12;C12N15/81;C12N1/19;C08H1/00;A61K47/36;A61K47/42;A61L27/20;A61L27/24;A61L27/50;A61L27/58;A61P27/02;C12R1/84 |
代理公司: | 北京商专润文专利代理事务所(普通合伙) 11317 | 代理人: | 朱栋梁 |
地址: | 210031 江苏省南京市高新开发*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 重组 胶原 蛋白 及其 人造 角膜 | ||
1.人造角膜,其由包括如下步骤的方法制备:
将500mg氨基酸序列如序列表中的SEQ ID NO:1所示的重组人源胶原蛋白加入10ml无菌水中,搅拌10分钟使其完全溶解,配制成5%(W/V)重组人源胶原蛋白水溶液;将200mg羧甲基壳聚糖溶解于10ml无菌水中,搅拌20分钟使其完全溶解,配制成2%(W/V)的壳聚糖水溶液;按1:1体积比(V/V)均匀混合配制的重组胶原蛋白壳聚糖混合溶液;将35mg EDC与65mg NHS充分溶解于2ml无菌水中,制成5%(W/V)的 EDC/NHS交联液;将0.5gβ-甘油磷酸钠与0.05g碳酸氢钠溶于1ml无菌水中,制得β-甘油磷酸钠碳酸氢钠溶液;取500μl重组胶原蛋白壳聚糖混合溶液置于 1.5ml离心管中,添加50μlEDC/NHS交联液与100μlβ-甘油磷酸钠碳酸氢钠溶液,并充分混匀;将配置好的溶液注入人造角膜模具内,每个模具加注100~150μl,静置于37℃培养箱中2小时待其完全成胶;将模具中已成型的重组胶原蛋白/壳聚糖人造角膜取出,经紫外灯光照40分钟灭菌后保存于磷酸盐缓冲液中。
2.权利要求1所述的人造角膜的制备方法,其包括:
将500mg氨基酸序列如序列表中的SEQ ID NO:1所示的重组人源胶原蛋白加入10ml无菌水中,搅拌10分钟使其完全溶解,配制成5%(W/V)重组人源胶原蛋白水溶液;将200mg羧甲基壳聚糖溶解于10ml无菌水中,搅拌20分钟使其完全溶解,配制成2%(W/V)的壳聚糖水溶液;按1:1体积比(V/V)均匀混合配制的重组胶原蛋白壳聚糖混合溶液;将35mg EDC与65mg NHS充分溶解于2ml无菌水中,制成5%(W/V)的 EDC/NHS交联液;将0.5gβ-甘油磷酸钠与0.05g碳酸氢钠溶于1ml无菌水中,制得β-甘油磷酸钠碳酸氢钠溶液;取500μl重组胶原蛋白壳聚糖混合溶液置于 1.5ml离心管中,添加50μlEDC/NHS交联液与100μlβ-甘油磷酸钠碳酸氢钠溶液,并充分混匀;将配置好的溶液注入人造角膜模具内,每个模具加注100~150μl,静置于37℃培养箱中2小时待其完全成胶;将模具中已成型的重组胶原蛋白/壳聚糖人造角膜取出,经紫外灯光照40分钟灭菌后保存于磷酸盐缓冲液中。
3.权利要求1所述的人造角膜在制备角膜替换制品、角膜修复制品、软性角膜接触镜或硬性角膜接触镜中的应用。
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