[发明专利]一种通用型快速提取生物样本总核酸的试剂盒及方法

说明书

本发明公开一种通用型快速提取生物样本总核酸的试剂盒及方法，通用型快速提取生物样本总核酸试剂盒，包括：Buffer ATL、Proteinase K、MBs磁珠、Buffer WSI、Buffer WSII、Buffer WSIII、Buffer ES、Buffer MDS。与现有核酸提取技术相比，本发明技术方案的有益效果为：无需对血液制品进行预处理，裂解结合一步完成，大大节省了全血基因组核酸提取的时间；使用Buffer WSI、Buffer WSII、Buffer WSIII三种洗涤液可以洗去样本中绝大部分的蛋白、酚类、多糖等抑制杂质，最大限度的减少杂质的污染对下游实验的干扰；本发明试剂盒及方法可通用于多种来源样本的核酸提取，适用范围广。

技术领域

本发明涉及生物学技术领域，尤其涉及一种通用型快速提取生物样本总核酸的试剂盒及方法。

背景技术

核酸检测越来越被广泛地应用于临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测等领域。目前来说，测序和荧光定量PCR这两项技术已经成为基因多态性检测的主流工具，数字PCR也在逐渐开始使用。然而，无论是测序还是qPCR，提取和纯化核酸都是必不可少的技术环节；

在传统和商业化的核酸提取方法中，以离心柱抽提法和酚-氯仿抽提法是两种最经典，也是应用最为普遍的方法，常应用于病原体检测机构和研究机构。虽然这两种方法提取的核酸质量高，但操作时间长，效率较低且自动化难度大。最重要的是，在实验中使用苯酚，氯仿等有毒试剂会对操作人员和生态环境造成极大危害。而纳米磁珠分离纯化技术，无需离心，无需接触有毒试剂，操作简单方便，易于实现自动化，实现快速，高质量的样品核酸提取。目前，磁珠法用于血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中分离出核酸的应用逐渐丰富，但普遍功能单一，难以应对复杂样本的使用场景。为更有效的解决并简化复杂样本核酸分析，研发一个能够通用地使用在多种样本核酸提取的试剂盒及方法即为必要。

因此，现有技术存在缺陷，需要改进。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种通用型快速提取生物样本总核酸的试剂盒及方法，方便对不同的样本提取核酸。

本发明的技术方案如下：提供一种通用型快速提取生物样本总核酸试剂盒，包括：Buffer ATL、Proteinase K、MBs磁珠、Buffer WSI、Buffer WSII、Buffer WSIII、BufferES、Buffer MDS。

所述Buffer ATL为包含有：盐酸胍、月桂酰肌氨酸钠、异丙醇的Tris-HCl缓冲液，Buffer ATL的pH为5.0-8.0；其中，盐酸胍的浓度为1-6mol/L，月桂酰肌氨酸钠的浓度为1-15wt％，异丙醇的浓度为40-60％v/v，所述Tris-HCl缓冲液浓度为10-50mmol/L。

所述Proteinase K为包含有：蛋白酶k、KCl、甘油的Tris-HCl缓冲液，ProteinaseK的pH为5.0-8.0；其中，蛋白酶k的浓度为20-50mg/mL，KCl的浓度为50-150mmol/L，甘油的浓度为30-50％v/v，Tris-HCl缓冲液的浓度为10-50mmol/L。

所述MBs磁珠为包含有：羟基磁珠或羧基磁珠、NaCl、无水乙醇的Tris-HCl缓冲液，MBs磁珠的pH为5.0-8.0；其中，所述羟基磁珠或羧基磁珠的浓度为1-5mg/mL，粒径为200-1500nm；NaCl的浓度为100-500mmol/L，无水乙醇的浓度为15-25％v/v，Tris-HCl缓冲液的浓度为10-50mmol/L。

Buffer WSI为包含有：NaCl、异丙醇、PEG的Tris-HCl缓冲液；Buffer WSI的pH5.0-8.0；其中，NaCl的浓度为500-1000mmol/L，异丙醇的浓度为75-85％v/v，PEG的浓度为35-45wt％，其中PEG分子量范围在4000-10000，Tris-HCl缓冲液的浓度为10-50mmol/L。