[发明专利]一种用于鉴别非洲猪瘟野毒与疫苗毒株的四重定量荧光探针引物组合、试剂盒及鉴别方法

权利要求书

1.一种用于鉴别非洲猪瘟野毒与疫苗毒株的四重定量荧光探针引物组合，其特征在于：包括：用于检测非洲猪瘟病毒B646L基因、非洲猪瘟病毒EP402R基因、非洲猪瘟病毒MGF360-14L基因、非洲猪瘟病毒疫苗EGFP基因的引物探针组合；

所述用于检测非洲猪瘟病毒B646L基因的引物探针组合，其核苷酸序列如下：

上游引物B646L-F：如SEQ ID NO:1所示

下游引物B646L-R：如SEQ ID NO:2所示

荧光探针B646L-P：如SEQ ID NO:3所示；

所述用于检测非洲猪瘟病毒EP402R基因的引物探针组合，其核苷酸序列如下：

上游引物EP402R-F：如SEQ ID NO:4所示

下游引物EP402R-R：如SEQ ID NO:5所示

荧光探针EP402R-P：如SEQ ID NO:6所示；

所述用于检测非洲猪瘟病毒MGF360-14L基因的引物探针组合，其核苷酸序列如下：

上游引物MGF360-F：如SEQ ID NO:7所示

下游引物MGF360-R：如SEQ ID NO:8所示

荧光探针MGF360-P：如SEQ ID NO:9所示；

所述用于检测非洲猪瘟病毒疫苗EGFP基因的引物探针组合，其核苷酸序列如下：

上游引物eGFP-F：如SEQ ID NO:10所示

下游引物eGFP-R：如SEQ ID NO:11所示

荧光探针eGFP-P：如SEQ ID NO:12所示。

2.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于：所述探针为水解探针，所述探针的5’端标记有荧光报告基团和3’端标记有淬灭基团。

3.根据权利要求2所述的引物探针组合，其特征在于：所述荧光报告基团选自FAM、HEX、Cy5、ROX中的任一种；所述淬灭基团选自BHQ1、TAMRA、BHQ2中的任一种。

4.根据权利要求2所述的引物探针组合，其特征在于，不同特异性探针的5’端标记荧光报告基团不同。

5.一种用于鉴别非洲猪瘟野毒与疫苗毒株的四重荧光定量PCR的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含如权利要求1-4任一项所述的探针引物组合。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括阳性对照，所述阳性对照包括含有非洲猪瘟病毒B646L基因的重组质粒、含有非洲猪瘟病毒EP402R基因的重组质粒、含有非洲猪瘟病毒MGF360-14L基因的重组质粒和含有荧光蛋白EGFP基因的质粒。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括阴性对照，所述阴性对照为水。

8.权利要求1-4任一项所述的引物探针组合或权利要求5-7任一项所述的试剂盒在鉴别非洲猪瘟野毒与疫苗毒株的应用，所述应用为非疾病诊断目的。

9.一种鉴别非洲猪瘟野毒株与疫苗毒株的方法，其特征在于：所述方法包括采用权利要求1-4任一项所述的引物探针组合或权利要求5-7任一项所述的试剂盒进行实时荧光定量PCR，收集荧光信号，确定受试样品中是否含有非洲猪瘟病毒野毒株和/或疫苗株。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述实时荧光定量PCR的反应条件为：94-96℃，2-3min；94-96℃，25-30s；58℃-60℃，30-35s；40-42个循环。