[发明专利]一种同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸及其制备方法

权利要求书

1.一种同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸，包括底板和从下到上依次粘附在底板上的样品垫、过滤垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上设置1条质控线C和3条检测线T，所述3条检测线T分别包被羊抗滴虫抗体、羊抗加德纳菌抗体和羊抗白色念珠菌抗体；所述质控线C包被有抗羊IgG；所述结合垫上喷涂有羊抗滴虫抗体标记量子点微球、羊抗加德纳菌抗体标记量子点微球和羊抗白色抗体标记量子点微球。

2.根据权利要求1所述同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸，其特征在于，羊抗滴虫抗体标记量子点微球、羊抗加德纳菌抗体标记量子点微球或羊抗白色念珠菌抗体标记量子点微球的制备方法，包括以下步骤：

1)向洗涤的量子点微球溶液依次添加N-羟基琥珀酰亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺进行活化反应，分离沉淀经洗涤后分散，得到活化量子点微球溶液；

2)将活化量子点微球溶液稀释，滴加羊抗滴虫抗体溶液、羊抗加德纳菌抗体溶液或羊抗白色念珠菌抗体溶液进行偶联反应，经封闭，分离沉淀，复溶，得到羊抗滴虫抗体标记的量子点微球溶液、羊抗加德纳菌抗体标记的量子点微球溶液和羊抗白色念珠菌抗体标记的量子点微球溶液。

3.根据权利要求2所述同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸，其特征在于，所述量子点微球溶液的质量浓度为0.8％～1.2％；

所述N-羟基琥珀酰亚胺或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺的添加终浓度独立为1～5mg/ml；

所述活化反应的时间包括25～35min。

4.根据权利要求2所述同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸，其特征在于，步骤2)中所述活化量子点微球溶液的稀释倍数为10～100倍。

5.根据权利要求4所述同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸，其特征在于，所述活化量子点微球溶液的体积和所述羊抗滴虫抗体、羊抗加德纳菌抗体或羊抗白色念珠菌抗体的质量比独立为1ml：2～5μg；

所述所述羊抗滴虫抗体溶液、羊抗加德纳菌抗体溶液或羊抗白色念珠菌抗体溶液的浓度为0.01～0.1mg/ml；

所述滴加的速度为1～5s/滴；每滴液的体积为30～50μl。

6.根据权利要求2～4任意一项所述同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸，其特征在于，所述羊抗滴虫抗体标记量子点微球、羊抗加德纳菌抗体标记量子点微球和羊抗白色抗体标记量子点微球按照1:1:1的体积比混合，得到的混合液喷涂在结合垫上，喷涂量为0.1～3μl/cm。

7.根据权利要求1所述同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸，其特征在于，所述抗羊IgG的包被浓度为1～2mg/ml；

羊抗滴虫抗体、羊抗加德纳菌抗体或羊抗白色念珠菌抗体的包被浓度独立为0.1～3mg/ml。

8.根据权利要求1或7所述同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸，其特征在于，所述羊抗滴虫抗体、羊抗加德纳菌抗体或羊抗白色念珠菌抗体由滴虫抗原、加德纳菌抗原或白色念珠菌抗原免疫小鼠制备得到。

9.根据权利要求1～5和7任意一项所述同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸，其特征在于，所述样品垫经过处理液浸泡处理后干燥得到；

所述处理液为含有质量百分含量0.09～0.11％BSA、质量百分含量9％～11％蔗糖、体积百分含量0.09％～0.11％吐温-20的9～11mMpH7.3～7.5的PBS缓冲液。

10.权利要求1～9任意一项所述同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤；

将硝酸纤维素膜、过滤垫、结合垫、样品垫、吸水纸粘贴于底板上，裁切条状。