[发明专利]一种同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸及其制备方法

说明书

本发明提供了一种同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸及其制备方法，属于体外诊断试剂技术领域。本发明提供的一种同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的高灵敏量子点荧光免疫层析试纸及其制备方法，基于双抗体夹心法检测原理进行检测，对灵敏度高度提升，提高疾病检测结果准确性；实现对三种病原微生物滴虫、加德纳菌和白色念珠菌的同时检测，操作简单、快速，5～10min获得检测结果；实现一次加样即可完成三项检测，样本用量低，50～80μl样本即可完成三项检测，具有较大的市场应用价值。

技术领域

本发明属于体外诊断试剂技术领域，具体一种同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸及其制备方法。

背景技术

阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)是寄生在人体阴道和泌尿道的鞭毛虫，主要引起滴虫性阴道炎和尿道炎，是以性传播为主的一种传染病。

加德纳菌(Gardnerella vaginalis)是一类革兰染色阴性或阳性的短杆菌，厌氧，嗜血，培养困难。是女性细菌性阴道病的主要病原菌之一，可经性接触传播，可引起输卵管妊娠、胎膜早破和新生儿早产等不良妊娠结局。

白色念珠菌(Candida albicans)呈卵圆形，由芽生孢子及细胞发芽伸长形成假菌丝，假菌丝与孢子相连成分枝或链状。霉菌阴道感染 80％～90％系白色念珠菌引起。

现有的滴虫、加德纳菌、白色念珠菌检测技术主流技术为显微镜观察法，检测结果的准确性主要为靠检验医师的主观判定，个体差异明显，客观性差。目前也已有的胶体金免疫层析技术开发的检测产品，虽然解决便捷性问题，但胶体金本身灵敏度差，与临床上诊断结果的符合率较低。另外涉及到样本量问题，目前基本采用阴道式子采样，样本量小，在保障检测浓度的前提下，不足以支撑多个项目的检测。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸及其制备方法，所述试纸对检测样品的需求量小，同时具有较高的灵敏度和检测结果准确性。

本发明提供了一种同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸，包括底板和从下到上依次粘附在底板上的样品垫、过滤垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜上设置1条质控线C和3条检测线T，所述3条检测线T分别包被羊抗滴虫抗体、羊抗加德纳菌抗体和羊抗白色念珠菌抗体；所述质控线C 包被有抗羊IgG；所述结合垫上喷涂有羊抗滴虫抗体标记量子点微球、羊抗加德纳菌抗体标记量子点微球和羊抗白色抗体标记量子点微球。

优选的，羊抗滴虫抗体标记量子点微球、羊抗加德纳菌抗体标记量子点微球或羊抗白色念珠菌抗体标记量子点微球的制备方法，包括以下步骤：

1)向洗涤的量子点微球溶液依次添加N-羟基琥珀酰亚胺、1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺进行活化反应，分离沉淀经洗涤后分散，得到活化量子点微球溶液；

2)将活化量子点微球溶液稀释，滴加羊抗滴虫抗体溶液、羊抗加德纳菌抗体溶液或羊抗白色念珠菌抗体溶液进行偶联反应，经封闭，分离沉淀，复溶，得到羊抗滴虫抗体标记的量子点微球溶液、羊抗加德纳菌抗体标记的量子点微球溶液和羊抗白色念珠菌抗体标记的量子点微球溶液。

优选的，所述量子点微球溶液的质量浓度为0.8％～1.2％；

所述N-羟基琥珀酰亚胺或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺的添加终浓度独立为1～5mg/ml；

所述活化反应的时间包括25～35min。

优选的，步骤2)中所述活化量子点微球溶液的稀释倍数为 10～100倍。

优选的，所述活化量子点微球溶液的体积和羊抗滴虫抗体、羊抗加德纳菌抗体或羊抗白色念珠菌抗体的质量比为1ml：2～5μg；