[发明专利]基于上转发光免疫层析技术的CRP和SAA的联合定量检测方法

说明书

本发明公开了基于上转发光免疫层析技术的CRP和SAA的联合定量检测方法。本发明所要保护的一个技术方案是检测A蛋白和/或B蛋白的免疫层析芯片，所述免疫层析芯片包含结合垫、分析膜、样品垫和吸水垫；结合垫上含有被生物标记物标记的抗A抗体1、抗B抗体1和质控物；分析膜上含有A检测点、B检测点和质控检测点。A蛋白可为C‑反应蛋白，B蛋白可为血清淀粉样蛋白A，分析膜上各检测点为圆形小点且横向排布，检测点连线与层析方向垂直，生物标记物为稀土纳米上转发光颗粒。实验证明，本发明制备的免疫层析芯片可应用于CRP和SAA的联合定量高灵敏和零背景检测，具有高稳定性、准确性和安全性，将在多重检测中具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及免疫技术诊断领域，具体涉及基于上转发光免疫层析技术的CRP和SAA的联合定量检测方法。

背景技术

感染性疾病检测标志物在感染引起的炎症反应早期已有不同程度的升高，对判断感染及其类型具有重要的作用，这些检测标志物包括C-反应蛋白(C-reactive protein，CRP)、血清淀粉样蛋白A(Serum amyloid Aprotein，SAA)、降钙素原(Procalcitonin，PCT)等。CRP是由肝细胞合成的一种急性时相反应蛋白，任何侵袭性感染或组织损伤等原因引起的炎症发生后的6～8小时内都会引起血清中的浓度明显升高，24～48小时达到顶峰，升高幅度与感染程度呈正相关，被誉为炎症标志物；CRP的半衰期为19小时，病毒感染时升高不明显，正常值为0～10mg/L。SAA是一种非特异性急性时相反应蛋白，由104个氨基酸组成，在多种病毒感染急性期(数小时内)都有显著的升高，如流感病毒、呼吸道合胞病毒等。健康人群大多处于3mg/L以下，96％小于10mg/L；浓度为10～100mg/L时提示病毒感染可能性大，100～500mg/L提示细菌感染急性期可能性大，≥500mg/L则提示病毒感染(重症)或细菌感染。对感染性疾病标志物的联合检测，能够提高准确性和特异性，从而实现及时精准诊断。

多重检测能够同时分析一个样本中的多个指标从而提高准确性和判断是否存在多种感染，能够有效的节约样本量从而减轻病人的痛苦，并能提高检测效率。通过集成化的酶联免疫分析平台实现多重检测，成本较高且较耗时，主要应用于医院的检验科。多重免疫POCT检测方法主要分别基于纸层析、芯片、磁珠、微流控和免疫层析等方法。其中免疫层析是目前单靶标最常用的POCT方法，因此多重免疫层析方法将会是最实用的POCT方法。

目前免疫层析多重检测主要通过基于单靶标试纸组合或在分析膜上喷多条检测带等方法实现。(1)基于单靶标试纸组合的多重免疫层析检测，主要是将多个单靶标以横向或纵向排列集合。其原理是将多个单靶标试纸的样品垫联合共用一个加样孔，样品加入后会分配给各个项目，其缺点是因各个试纸成分不同带来阻力不同而使得样品很难被均匀分配。(2)在分析膜上喷多个条带实现多重检测，是在分析膜上分布多个前后平行的检测带实现同时检测多个项目。基于多条带的试纸，因前方条带完全挡住了层析的液体，后方条带的反应容易受到前方的干扰，这使得利用多条带实现双靶标检测较容易，但是四个或更多条带排布于同一试纸条上时则很难成功制备，即三靶标或更多靶标检测很难被实现。

稀土纳米上转发光颗粒(UCP颗粒)具有独特的发光特性，能够实现高灵敏和零背景检测，并具有高稳定性和安全性等特性。将UCP颗粒作为芯片的生物标记物，将在多重检测中具有广阔的应用前景。因此，研制一种基于上转发光技术的横向芯片，并用于感染性疾病标志物SAA和CRP的检测，具有重要的临床应用价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何基于上转发光免疫层析技术准确定量检测C-反应蛋白和/或血清淀粉样蛋白A。

为了解决上述技术问题，本发明首先提供了检测A蛋白和/或B蛋白的免疫层析芯片。所述免疫层析芯片包含结合垫和分析膜。

上文所述结合垫上可含有被生物标记物标记的抗A抗体1、抗B抗体1和质控物。