[发明专利]一种创伤弧菌灭活疫苗及其制备方法和用途

说明书

本发明提供了一种创伤弧菌灭活疫苗的制备方法，包括：1)将TC38抗菌肽加入到创伤弧菌菌液中，进行灭活处理，得到灭活的创伤弧菌孵育液；2)将所述灭活的创伤弧菌孵育液离心，收集菌体沉淀，得灭活菌体；3)将所述灭活菌体以无菌PBS清洗数次后，分散于无菌PBS中，即得灭活疫苗。本发明还提供了相应的灭活疫苗及其应用。本发明以TC38抗菌肽灭活创伤弧菌得到了一种新型灭活疫苗，该疫苗在大菱鲆中诱发的相对免疫保护率显著高于福尔马林灭活疫苗组，可诱导鱼体产生更高的非特异和特异性免疫应答水平，在水产动物创伤弧菌病害防治中具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及动物医学技术领域，具体涉及一种创伤弧菌灭活疫苗及其制备方法和用途。

背景技术

创伤弧菌作为人和海洋生物共患病的弧菌，它主要有三种类型：生物I型，它易导致摄入性病例和伤口感染；生物II型，是造成海洋养殖动物患病的致病类型；以及能够感染人类的生物Ⅲ型(吴后波和潘金培，2001；Bisharat et al.,1999；Kelly and McCormick,1981；Tison et al.,1982)。创伤弧菌的致病性是多种致病因子共同作用的结果，主要包括溶血素、MARTX毒素、铁载体、荚膜多糖、脂多糖以及金属蛋白酶等(王青柏，2018；Li andWang,2020)。感染创伤弧菌后，易造成鳗鲡(Fouz and Amaro,2003)、石斑鱼(Abdullah etal.,2017)、鲟鱼(Si et al.,2010)、罗非鱼(Chen et al.,2010)和金鲳鱼(Li et al.,2006)等经济动物大批量死亡。针对弧菌引起的疾病大多数采取抗生素进行治疗，有研究发现从病害动物分离出的弧菌对多种抗生素检测出耐药基因和耐药性(Kashulin et al.,2017；Letchumanan et al.,2015)。随着水产疫苗研发工作的不断开展，疫苗在水产养殖病害中的应用越来越广泛。传统灭活疫苗使用福尔马林作为灭活剂，但灭活时完整抗原成分会遭到破坏，存在免疫效果不理想、免疫持续时间短的缺点(Sun et al.,2020)。弧菌的细胞外和表面蛋白质易于被感染宿主识别，具有作为的疫苗潜力并能提供免疫保护作用(Wang et al.,2017)。同时，在水产疫苗方面关于创伤弧菌疫苗的研究相对较少，开发能够保留相对完整抗原结构的灭活疫苗，成为水产灭活疫苗的开发重点。

在申请号为201610357120.6、名称为“一种抗菌肽TC38及其应用”的中国专利申请中公开了抗菌肽TC38具有杀伤创伤弧菌的作用，但是根据已公开的文献记载，美国红鱼、鲤鱼等硬骨鱼的组织因子途径抑制剂(TFPI)的C端衍生肽与创伤弧菌孵育后，透射电镜观察到细胞结构破裂、细胞内容物流出(He et al.,2018；Su et al.,2020)，细胞结构破裂表明难以将TFPI用于制备灭活疫苗。此外，当前的创伤弧菌疫苗主要是创伤弧菌和其他致病菌的联合疫苗(Huang et al.,2012；Shoemaker et al.,2011)和重组疫苗(Kohei et al.,2018)等类型，相关研究相对较少，因此，研发针对水产动物弧菌病原的高效免疫学防控方法，已成为目前水产养殖业健康发展的迫切需求。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种基于来源于半滑舌鳎TFPI-2的C末端衍生肽TC38制备的创作菌创新灭活疫苗。基于研究发现在以TC38处理创伤弧菌后，随着时间的推移，创伤弧菌细胞内容物逐渐降解，细胞膜却依旧保持完整性，本发明制备了关于创伤弧菌的TC38灭活疫苗，并在大菱鲆体内检测了TC38灭活疫苗诱发的相对免疫保护率和免疫机制，为创伤弧菌灭活疫苗的研究提供新的途径。

本发明提供了一种创伤弧菌灭活疫苗的制备方法，包括：

1)将TC38抗菌肽加入到创伤弧菌菌液中，进行灭活处理，得到灭活的创伤弧菌孵育液；

2)将所述灭活的创伤弧菌孵育液离心，收集菌体沉淀，得灭活菌体；

3)将所述灭活菌体以无菌PBS清洗数次后，分散于无菌PBS中，即得灭活疫苗。