[发明专利]一种染色方法、试剂盒及应用有效
申请号: | 202110963181.8 | 申请日: | 2021-08-20 |
公开(公告)号: | CN113607534B | 公开(公告)日: | 2022-10-18 |
发明(设计)人: | 邢雅南;李三华;米贯勋;赵琳琳;张林姿;牛银银;刘文弟;齐华;刘畅 | 申请(专利权)人: | 河南赛诺特生物技术有限公司 |
主分类号: | G01N1/31 | 分类号: | G01N1/31;G01N33/532 |
代理公司: | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人: | 郭佳效 |
地址: | 450001 河南省郑州*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 染色 方法 试剂盒 应用 | ||
本发明涉及一种染色方法、试剂盒及应用。本发明通过在P16INK4a免疫细胞化学染色的基础上联合巴氏染色,并对染色步骤进行了改进调整,采用了含有冰醋酸和丙酮的固定剂,同时用通透剂Ⅰ‑通透剂Ⅱ联合通透处理的方式代替高压修复,有效消除了背景和非特异性着色。采用该方法染色的细胞涂片,能够在同一切片上同时观察P16INK4a免疫细胞化学染色结果与细胞的形态结构,增加了单张片子的信息含量,避免了仅依赖形态学的主观性和不确定性,进而提高结果的重复性和判读的准确性。本发明进一步提供了用于P16INK4a免疫细胞化学染色与巴氏染色联合染色的试剂盒,有助于实现数字化自动阅片,具有显著的经济和社会效益。
技术领域
本发明属于细胞学染色技术领域,具体涉及一种染色方法、试剂盒及应用。
背景技术
宫颈癌是影响全球女性健康的第四大恶性肿瘤,也是我国第二大女性恶性肿瘤。当前宫颈癌的筛查流程是“宫颈脱落细胞检查-阴道镜检查-活检病理检查”三阶梯的筛查方式,活检病理是诊断的“金标准”。液基薄层细胞学检查(TCT)是早期筛查宫颈癌的有效手段,易受取材、染色及病理医师主观判断的影响,存在一定的假阴性率或漏诊率,诊断准确性欠佳。HPV病毒检测作为一种辅助检测手段,虽然敏感性高,但特异性低,同时还存在着阴道镜转诊率高的弊端。P16INK4a抑癌基因蛋白表达作为早期宫颈癌的生物标志物,具有较高的特异性和灵敏度,在宫颈组织活检样本中,已经得到普遍认可与应用。
2012年,美国病理学会(CAP)、美国阴道镜与宫颈病理学会(ASCCP)、美国临床病理学会(ASCP)对宫颈癌筛查的联合指南建议,特定的P16INK4a蛋白表达是高危型HPV感染是否影响细胞周期调控的替代生物标志物。2014版TBS(The Bethesda System)指出:P16INK4a免疫细胞化学染色技术可以辅助细胞学诊断。2017年我国《子宫颈癌综合防控指南》和2014年第4版WHO《女性生殖器官肿瘤分类》推荐使用P16INK4a作为辅助LSIL和HSIL诊断的分子生物学指标,提高宫颈癌诊断的准确性。
P16INK4a基因为多肿瘤抑制基因,其表达的蛋白可直接参与调控细胞周期,通过抑制细胞增殖和分裂达到抑癌作用。正常细胞周期中表达的P16INK4a表现为抗增殖效应,因此在终末分化的上皮细胞中,正常水平下不能用免疫组化方法检测到。但在HPV相关的癌前病变和癌变中,代表确立的维持恶性表型的必要因素E7癌蛋白整合到宿主基因内,结合Rb蛋白使其失活,细胞持续增殖聚集形成肿瘤,相应P16INK4a出现了强烈的过度表达而被检测到。因此P16INK4a被认为是HPV感染转化的一个替代性标志物,将P16INK4a免疫标记应用于液基细胞学,可利用抗原抗体特异性结合的原理,在液基细胞学中提供特异性的染色技术,同时联合TCT细胞形态学结果作出精准判断。
然而目前在宫颈癌大规模筛查工作中,液基细胞学通常采用巴氏染色后诊断,有时常需要进一步做免疫细胞化学染色以满足鉴别诊断。但由于再次取材受限,又难以重新获得标本制片,用细胞学剩余标本重新制成的细胞涂片又没有原涂片中的可疑细胞,因此如何在原涂片上进行免疫细胞化学染色成为关键。
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