[发明专利]一种低氧培养脐带来源间充质干细胞的方法

权利要求书

1.一种低氧培养脐带来源间充质干细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

将原代脐带来源间充质干细胞接种在培养基上，接种密度为10000-50000个/ml，置于培养温度37℃，氧气体积分数1-3％，二氧化碳体积分数2-2.5％，余量氮气的环境中进行传代扩增96-108h后，收集间充质干细胞；

所述培养基包括基础培养基和传代添加物；

所述基础培养基为MEM、F12、低糖DMEM和高糖DMEM中的一种或多种组合物；

所述传代添加物以培养基终浓度计，包括以下组分，谷胱甘肽11-15μg/ml，α-生育酚0.5-2.5μg/ml，β-生育酚0.5-2.0μg/ml，乙酰唑胺2.5-3.0ng/ml，胰岛素10-20μg/ml，维生素C8-10μg/ml。

2.根据权利要求1所述的一种低氧培养脐带来源间充质干细胞的方法，其特征在于：原代脐带来源间充质干细胞培养时，初始氧气体积分数为1％，氧气体积分数以0.1％/2h的速率增长至3％后，保持培养10h，氧气体积分数以0.1％/5h的速率下降至2.3-2.4％，保持培养至传代培养结束。

3.根据权利要求1所述的一种低氧培养脐带来源间充质干细胞的方法，其特征在于：间充质干细胞培养过程中，每2天更换一次培养基。

4.根据权利要求1所述的一种低氧培养脐带来源间充质干细胞的方法，其特征在于，所述原代脐带来源间充质干细胞由以下步骤制得：采用组织贴壁法，取离体的脐带，剥离羊膜和血管后，剪碎组织，放入含10％FBS的α-MEM完全培养基进行培养，待细胞从组织块中爬出，得原代脐带来源间充质干细胞。

5.根据权利要求1所述的一种低氧培养脐带来源间充质干细胞的方法，其特征在于：所述传代添加物以培养基终浓度计，还包括TGF-β0.8-1.0ng/ml。

6.根据权利要求5所述的一种低氧培养脐带来源间充质干细胞的方法，其特征在于：所述传代添加物以培养基终浓度计，包括以下组分，谷胱甘肽12μg/ml，α-生育酚2.1μg/ml，β-生育酚1.6μg/ml，乙酰唑胺2.8ng/ml，胰岛素16μg/ml，维生素C9μg/ml，TGF-β0.8ng/ml。