[发明专利]猪易感相关致病菌检测的LAMP引物组及基于此的试剂盒和LAMP芯片和应用

说明书

本发明属于病菌检测技术领域，特别是涉及猪易感相关致病菌检测的LAMP引物组及基于此的试剂盒和LAMP芯片和应用。本发明提供了猪易感相关致病菌检测的LAMP引物组，所述LAMP引物组包括猪胸膜肺炎放线杆菌引物组、副猪嗜血杆菌引物组、猪霍乱沙门氏菌引物组、猪支气管败血波氏杆菌引物组、多杀性巴氏杆菌引物组等。本发明提供的LAMP引物组特异性高，同时进行检测猪易感病菌时不会出现交叉反应，能够精准的判断患病种类，并且具有良好的灵敏性。将上述LAMP引物组利用微流控芯片技术应用于检测中，可在等温条件下快速、高效、高特异性地扩增目的基因序列，并且在1h内完成扩增；具备的简便快捷的有点更适合基层适用性。

技术领域

本发明属于LAMP检测试剂制备技术领域，特别是涉及猪易感相关致病菌检测的LAMP引物组及基于此的试剂盒和LAMP芯片和应用。

背景技术

规模化养殖的程度不断提高能够有效提高养殖业的效益，但是这种养殖模式会提高猪群疾病发生的概率，还会对传染类疾病的防控带来新的挑战。现阶段制约养猪业发展的第一大因素就是疾病，就现阶段猪病流行的状况而言，多种病原菌的混合感染是目前猪场疾病发展的一个趋势。其中猪支气管败血波氏杆菌、猪沙门氏菌、猪多杀性巴氏杆菌等猪呼吸及猪繁殖疾病的发病率在逐渐增加。

猪源疾病呈现多元化的发展趋势，也增加了疾病的防控难度。为了防控猪源疾病，建立对猪场发病猪的混合病原菌的快速检测机制，是对猪疾病控制的关键所在。

针对于猪易感病原菌的检测技术主要包括传统的微生物学诊断技术、血清学诊断技术和分子生物学诊断技术。目前以PCR为代表的分子生物学诊断技术及其衍生检测技术占据主体，但是上述技术都存在一定的局限性，如检测流程繁琐、工作量大、检测仪器要求高等缺陷。因此，在科学研究及生产实践中开发出一种能够同时检测多种病原菌的快速简便检测方法较为迫切。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了涉及猪易感相关致病菌检测的LAMP引物组及基于此的试剂盒和LAMP芯片。本发明提供的多组LAMP引物组具有灵敏度高、特异性强的优势，能够同时检测多种病原菌。

为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

本发明提供了猪易感相关致病菌检测的LAMP引物组，所述猪易感相关致病菌包括：猪胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、猪霍乱沙门氏菌、猪支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、猪链球菌和猪丹毒；所述LAMP引物组包括猪胸膜肺炎放线杆菌引物组、副猪嗜血杆菌引物组、猪霍乱沙门氏菌引物组、猪支气管败血波氏杆菌引物组、多杀性巴氏杆菌引物组、猪链球菌引物组和猪丹毒引物组；

所述猪胸膜肺炎放线杆菌引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的正向外引物F3，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的反向外引物B3，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的正向内引物FIP和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的反向内引物BIP；

所述副猪嗜血杆菌引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的正向外引物F3，核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的反向外引物B3，核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的正向内引物FIP和核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的反向内引物BIP；

所述猪霍乱沙门氏菌引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的正向外引物F3，核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的反向外引物B3，核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示的正向内引物FIP和核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示的反向内引物BIP；

所述猪支气管败血波氏杆菌引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示的正向外引物F3，核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示的反向外引物B3，核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示的正向内引物FIP和核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示的反向内引物BIP；