[发明专利]pSFV-p54复制子颗粒及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种pSFV-p54复制子颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以pSFV-sp6-EGFP质粒和flag-p54基因为材料，构建得到pSFV-sp6-p54质粒；所述flag-p54基因如SEQ ID NO：1所示；

(2)分别将SFV-helper辅助质粒和所述pSFV-sp6-p54质粒线性化并进行体外转录，将所得mRNA共电转入BHK细胞或Vero细胞中，得到pSFV-p54复制子颗粒。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)包括以下步骤：

使用BamHI/SmaI内切酶对pSFV-sp6-EGFP质粒进行双酶切，将酶切产物与flag-p54基因进行同源重组，得到重组产物；将所述重组产物导入感受态细胞，鉴定，提取得到pSFV-sp6-p54质粒。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，采用如SEQ ID NO：2-3所示的引物对重组产物进行所述鉴定。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述感受态细胞为DH5α细胞或Trans1-T1 Phage Resistant化学感受态细胞。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)还包括对所述pSFV-sp6-p54质粒进行酶切鉴定及测序的操作。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中采用SpaI酶切使所述pSFV-sp6-p54质粒线性化，采用SpeI酶切使所述SFV-helper辅助质粒线性化。

7.一种pSFV-p54复制子颗粒，其特征在于，由权利要求1-6中任一项所述的制备方法所制得。

8.权利要求7所述的pSFV-p54复制子颗粒在表达非洲猪瘟病毒p54蛋白中的应用。

9.权利要求7所述的pSFV-p54复制子颗粒在制备RNA疫苗中的应用。

10.一种非洲猪瘟疫苗，其特征在于，包含权利要求7所述的pSFV-p54复制子颗粒。