[发明专利]基于AI-2分子响应的启动元件及其构建的大肠杆菌动态调控系统和方法有效
| 申请号： | 202110968581.8 | 申请日： | 2021-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN113667687B | 公开（公告）日： | 2023-08-01 |
| 发明（设计）人： | 刘龙;陈坚;刘振民;吕雪芹;堵国成;李江华;苏米亚;林璐 | 申请（专利权）人： | 光明乳业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/113;C12N15/65;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京东正专利代理事务所(普通合伙) 11312 | 代理人： | 张亦华 |
| 地址： | 201103 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 ai 分子 响应 启动 元件 及其 构建 大肠杆菌 动态 调控 系统 方法 | ||
1.一种基于AI-2分子响应的大肠杆菌CRISPR-dCpf1动态调控系统，其特征在于，包括dCpf1蛋白表达载体pACYDuet-dCpf1、报告荧光蛋白GFP和mCherry表达载体pRSFDuet-GFP-mCherry和报告蛋白的crRNA表达载体pETDuet-crRNA；所述pACYDuet-dCpf1表达载体包括细胞密度依赖型启动元件PJ23119-LsrR-PlsrA；选用大肠杆菌中转录激活因子CRP融合在dCpf1蛋白的C端。
2.一种基于AI-2分子响应的大肠杆菌CRISPR-dCpf1动态调控系统的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)选择质粒pACYDuet、pRSFDuet和pETDuet作为出发载体，将FndCpf1和PJ23119-LsrR-PlsrA基因片段与pACYDuet进行重组连接，构建pACYDuet-PJ23119-LsrR-PlsrA-dCpf1载体；将GFP基因和线性化载体pRSFDuet进行重组连接，构建pRSFDuet-GFP载体；将crRNA片段和线性化载体pETDuet进行重组连接，构建crRNA基因的pETDuet-crRNA载体；
(2)以pACYDuet-PJ23119-LsrR-PlsrA-dCpf1为模板，将转录激活因子CRP融合在dCpf1蛋白的C端，构建dCpf1激活质粒pACYDuet-PJ23119-LsrR-PlsrA-dCpf1-CRP；
(3)以步骤(1)中的pRSFDuet-GFP载体为模板，将mCherry的基因片段与pRSFDuet-GFP进行重组连接，构建荧光激活和抑制的报告载体pRSFDuet-GFP-mCherry；
(4)将pACYDuet-PJ23119-LsrR-PlsrA-dCpf1-CRP质粒与pRSFDuet-GFP-mCherry和pETDuet-crRNA载体共转化到E.coli MG1655感受态中。
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