[发明专利]一种能解酒的菌株的筛选方法及应用

权利要求书

1.一种能解酒的菌株的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、对筛选培养基进行灭菌处理，并在完成灭菌处理后，向筛选培养基中加入无菌乙醛，在无菌接入泡菜或者酸奶制品后进行厌氧培养，之后液相检测乙醛浓度，对乙醛浓度降低且菌体存活的微生物菌群进行单菌落平板分离；

其中，所述无菌乙醛采用以下方法制备：使用无菌滤器过滤40％乙醛至无菌容器中，按照0.1％的终浓度计算，1L的筛选培养基中含有2.5ml无菌的体积分数为40％的乙醛；

其中，所述筛选培养基由M17培养基加热溶于纯化水中，完成灭菌后制得；

其中，所述无菌乙醛在筛选培养基中的浓度为0.1％-0.5％，所述平板上设有富营养培养基；

步骤二、挑取位于平板上的所述单菌落，再次使用筛选培养基进行纯培养，之后对所述单菌落破碎，检测发酵液中乙醛脱氢酶活性，并选择活性较高的菌株继续进行纯培养；

步骤三、对活性较高的菌株离心得到纯菌体后，使用PBS重悬，制备菌悬浮液，再次对菌体进行破碎，测其胞内的乙醛脱氢酶活性，选择活性较高的菌株为目标菌株。

2.根据权利要求1所述的一种能解酒的菌株的筛选方法，其特征在于：

所述富营养培养基包括以下各浓度组分：

葡萄糖为5-10g/L、乳糖为5-10g/L、蛋白胨为10-20g/L、酵母粉为3-5g/L、氯化钠为2-4g/L、无水乙酸钠为0.5-1.5g/L、维生素C为0.1-0.5g/L、溴甲酚紫为0.04g/L和琼脂为20g/L。

3.根据权利要求2所述的一种能解酒的菌株的筛选方法，其特征在于：

所述富营养培养基的制取方法为：按比例调配，之后加入一定量纯化水混匀，再调节pH值后灭菌处理；加入所述纯化水的量为1L，调节pH值为中性；所述灭菌处理至少满足：灭菌时间20min，灭菌温度115℃。

4.根据权利要求1所述的一种能解酒的菌株的筛选方法，其特征在于：

在步骤一中和步骤二中，所述无菌乙醛在筛选培养基中的培养温度为30±1℃，在厌氧环境下培养24h；所述筛选培养基的pH值范围为7.0±1。

5.根据权利要求4所述的一种能解酒的菌株的筛选方法，其特征在于：

所述筛选培养基由42.3g的M17培养基加热溶于1L的纯化水中制得；制备条件为：高压灭菌15min，灭菌温度115℃。

6.根据权利要求1所述的一种能解酒的菌株的筛选方法，其特征在于：

在步骤二中，在挑取平板上所述单菌落进行纯培养时，保持培养温度为30℃，震荡厌氧培养24h；

所述发酵液采用超高压连续流细胞破碎仪直接破碎，再使用乙醛脱氢酶检测试剂盒检测乙醛脱氢酶的活性，并依据其在340nm下吸光度的增加值，测其相对活性。

7.根据权利要求1所述的一种能解酒的菌株的筛选方法，其特征在于：

在步骤三中，得到的所述纯菌体使用灭菌生理盐水洗涤2次后，再使用灭菌的PBS溶液等体积悬重，再使用超高压连续流细胞破碎仪对菌悬浮液进行破碎，再使用乙醛脱氢酶检测试剂盒检测乙醛脱氢酶的活性，并依据其在340nm下吸光度的增加值，测其相对活性；所述纯菌体在6000g下离心5min获得。