[发明专利]一种能解酒的菌株的筛选方法及应用

说明书

本发明公开了一种能解酒的菌株的筛选方法及应用，包括以下步骤：步骤一、对筛选培养基进行灭菌处理，并再完成灭菌处理后，向筛选培养基中加入无菌乙醛，再无菌接入泡菜或者酸奶制品后进行厌氧培养，之后液相检测乙醛浓度，对乙醛浓度降低且菌体存活的微生物菌群进行单菌落平板分离；其中，所述无菌乙醛在筛选培养基中的浓度为0.1％‑0.5％，所述平板上设有富营养培养基。本发明中，进行高通量筛选，以耐受乙醛并能降解乙醛为目标。由于乙醛的最终产物是乙酸，本发明以泡菜、酸奶制品等发酵产物为初始目标，筛选耐受乙醛的菌株，并对得到的菌株进行降解乙醛能力的检测，挑取降解能力较强的作为目标菌株。

技术领域

本发明涉及生物工程发酵技术领域，具体涉及一种能解酒的菌株的筛选方法及应用。

背景技术

每年全球有超过250万人的死因与酗酒有关，且这一数字一直呈上升趋势，可见酗酒已严重危害到人们的身体健康，甚至还可能引发一系列社会问题。

当人体饮酒后，除少部分酒精可随着呼吸、汗液或尿液等直接排出体外，其余大量酒精均需进入肝脏进行氧化分解，经乙醇脱氢酶将酒精转化为乙醛，再经肝乙醛脱氢酶氧化为乙酸，最后变成水和二氧化碳排出体外，这一过程对肝脏造成严重负担，极易造成肝损伤。乙醛是引起酒精性肝脏损伤最主要的毒性物质，可以引起肝细胞损伤、炎症以及细胞外基质产生和纤维化的形成。目前，国内外常见的解酒药物及保健品及食品大都是以中药材、食材等配制而成，多为利尿类化学合成药物，护肝养胃类中药，蛋白肽类药物等，但是药效见效太慢，解酒效果不好。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能解酒的菌株的筛选方法及应用，以解决利尿类化学合成药物技术，药效见效太慢，解酒效果不好的技术问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

根据本发明的一个方面，提供了一种能解酒的菌株的筛选方法，包括以下步骤：

步骤一、对筛选培养基进行灭菌处理，并再完成灭菌处理后，向筛选培养基中加入无菌乙醛，再无菌接入天然发酵产物后进行厌氧培养，之后液相检测乙醛浓度，对乙醛浓度降低且菌体存活的微生物菌群进行单菌落平板分离；

其中，所述无菌乙醛在筛选培养基中的浓度为0.1％-0.5％，所述平板上设有富营养培养基；

步骤二、挑取位于平板上的所述单菌落，再次使用筛选培养基进行纯培养，之后对所述单菌落破碎，检测发酵液中乙醛脱氢酶活性，并选择活性较高的菌株继续进行纯培养；

步骤三、对活性较高的菌株离心得到纯菌体后，使用PBS重悬，制备菌悬浮液，再次对菌体进行破碎，测其胞内的乙醛脱氢酶活性，选择活性较高的菌株为目标菌株。

进一步的，所述富营养培养基包括以下各浓度组分：

葡萄糖为5-10g/L、乳糖为5-10g/L、蛋白胨为10-20g/L、酵母粉为3-5g/L、氯化钠为2-4g/L、无水乙酸钠为0.5-1.5g/L、维生素C为0.1-0.5g/L、溴甲酚紫为0.04g/L和琼脂为20g/L。

更进一步的，所述富营养培养基的制取方法为：按比例调配，之后加入一定量纯化水混匀，再调节pH值后灭菌处理；

优选的，加入所述纯化水的量为1L，调节pH值为中性；

所述灭菌处理至少满足：灭菌时间20min，灭菌温度115℃。

进一步的，在步骤一中和步骤二中，所述无菌乙醛在筛选培养基中的培养温度为30±1℃，在厌氧环境下培养24h；

优选的，所述无菌乙醛在筛选培养基中的培养温度为30℃，所述筛选培养基的pH值范围为7.0±1。

更进一步的，所述筛选培养基由M17培养基加热溶于纯化水中，完成灭菌后制得；