[发明专利]TET酶活性测定方法及TET酶活性小分子激活剂或抑制剂的高通量筛选方法在审
| 申请号： | 202110969301.5 | 申请日： | 2021-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN113640283A | 公开（公告）日： | 2021-11-12 |
| 发明（设计）人： | 江翱;刘倩;马海玲;孙睿;陈晶晶;侯策;曹振;宋东亮 | 申请（专利权）人： | 翌圣生物科技（上海）股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N21/78 | 分类号： | G01N21/78;G01N21/31 |
| 代理公司： | 苏州根号专利代理事务所(普通合伙) 32276 | 代理人： | 朱华庆 |
| 地址： | 200120 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | tet 活性 测定 方法 分子 激活剂 抑制剂 通量 筛选 | ||
1.一种TET酶活性测定方法，其特征在于其步骤包括：
（1）将含有5mC 的DNA与待测TET酶混合后孵育；
（2）在反应体系中加入SDH和DCPIP进行反应；
（3）加入三氯乙酸终止反应；
（4）酶标仪测量反应液在600nm处的吸收峰值，峰值越高则代表酶活性越强。
2.根据权利要求1所述的TET酶活性测定方法，其特征在于：步骤（1）中所述含5mC 的DNA为5mCDNA标准品，其序列为AAAAAAAm5CGAAAAAAATTTTTTTm5CGTTTTTTT。
3.根据权利要求1所述的TET酶活性测定方法，其特征为：步骤（1）中5mC DNA与TET酶在TET酶反应缓冲液中孵育10-30min。
4.根据权利要求3所述的TET酶活性测定方法，其特征为：步骤（2）中还加入吩嗪二甲酯硫酸盐。
5.根据权利要求4所述的TET酶活性测定方法，其特征为：步骤（2）的SDH至少含有人源SDHA和SDHB。
6.SDH和DCPIP联合在测定TET酶活性中的应用。
7.一种TET酶活性小分子激活剂或抑制剂的高通量筛选方法，其特征在于其步骤包括：
A、在反应容器中加入TET酶反应缓冲液和TET酶；
B、在反应容器中加入小分子药物，孵育一段时间；
C、在反应容器中加入5mC DNA，孵育一段时间；
D、在反应容器中加入SDH和DCPIP进行反应；
E、加入三氯乙酸终止反应；
F、酶标仪测量反应液在600nm处的吸收峰值，以未添加小分子药物的样本作为对照，比较TET酶的活力变化，吸附峰值增大则代表该小分子药物为TET酶的活性促进小分子，吸附峰值降低则代表该小分子药物为TET酶的活性抑制小分子药物。
8.根据权利要求7所述的高通量筛选方法，其特征为：反应容器为96孔板或384孔板，同时进行多个小分子药物的筛选。
9.根据权利要求8所述的高通量筛选方法，其特征为：步骤（2）中室温孵育5-10min，步骤（3）中37℃孵育30-60min。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于翌圣生物科技（上海）股份有限公司，未经翌圣生物科技（上海）股份有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202110969301.5/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种防龋漱口水及其制备方法
- 下一篇：一种纯电游船驱动系统电气架构及控制方法
