[发明专利]一种酪蛋白保护的金银纳米簇的制备方法及其在金霉素检测中的应用

说明书

本发明涉及金银纳米簇合成技术领域，具体涉及一种酪蛋白保护的金银纳米簇的制备方法及其在金霉素检测中的应用，步骤如下：步骤一、称取酪蛋白，加入750μL水溶解，再加入50μL浓度为3M的氢氧化钠溶液调节溶液pH，在温度为37℃‑70℃水浴中加热20分钟，得到溶液A；步骤二、将氯金酸加入到步骤(一)得到的溶液A中混合均匀，再加入硝酸银溶液混合均匀，在温度为37℃‑70℃水浴中加热0‑4小时，得到溶液B；将步骤(二)得到的溶液B，保存在4℃条件下，得到酪蛋白‑金银纳米簇。本发明制得的荧光金银纳米簇具有独特的光物理特性、制备方法简单、高稳定性，检测金霉素方法快速便捷、检测灵敏度高，检测限低，是应用于生物和医学领域的理想荧光纳米材料。

技术领域

本发明涉及金银纳米簇合成技术领域，具体涉及一种酪蛋白保护的金银纳米簇的制备方法及其在金霉素检测中的应用。

背景技术

酪蛋白约占牛奶蛋白的80％，是一种含磷且具有亲水性和疏水性氨基酸残基的两亲性共聚物。目前主要用作食物原料或微生物培养基，也是幼儿氨基酸以及钙磷的来源之一。酪蛋白具有防止矿物质流失，防治骨质疏松与佝偻病，治疗缺铁性贫血、缺镁性神经炎等多种生理功能；同时，还能促进常量元素钙、镁与微量元素铁、锌等的吸收。酪蛋白含有多种氨基酸，尤其是丰富的脯氨酸残基，基于已有报道使用脯氨酸合成金属纳米簇，我们认为酪蛋白有望成为合成纳米簇的模板。

金属纳米团簇通常由几个到几百个原子组成，是具有荧光的超小纳米颗粒。化学还原法是常用的制备方法，其中蛋白质由于其含有许多活性位点如硫醇、氨基、羧基和羟基，能聚集和还原金属离子，常作为稳定剂和还原剂作用于金属中心，而且蛋白的结构稳定可保证其荧光性能不会因聚集而被淬灭，是常用的合成模板。制备所得的金属纳米簇具有超小尺寸，荧光强，斯托克斯位移较大，毒性低，稳定性好等优点，此外因其独特的光物理特性以及可能在细胞和组织中成像，是应用于分析和生物领域的理想荧光材料。双金属纳米簇由于在物理化学性质上具有协同作用，更有利于提高荧光强度而受到广泛关注。

金霉素是一种常见的广谱的四环素类抗生素，对革兰阳性菌和阴性菌均有抑制作用，可治疗畜禽的伤寒、白痢等病，同时也作为促进生长剂用于动物饲料中；但如果使用剂量不当或长期频繁使用，在动物体内形成残留会造成严重副作用，如水土污染、细菌产生耐药性，威胁人类健康。而针对金霉素的传统检测方法具有稳定性差、灵敏度低、耗时长等局限性，因而急需开发一种快捷高效的检测方法。

发明内容

针对以上问题，本发明提供了一种酪蛋白保护的金银纳米簇的制备方法及其在金霉素检测中的应用，采用一步合成法在水溶液中制备酪蛋白-金银纳米簇，其具有独特的光物理特性、无毒且具有优异的生物相容性，检测金霉素方法快速简单、检测灵敏度好、检测限低。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种酪蛋白保护的金银纳米簇的制备方法，具体步骤如下：

步骤一、称取酪蛋白，加入750μL水溶解，再加入50μL浓度为3M的氢氧化钠溶液调节溶液pH，在温度为37℃-70℃水浴中加热20分钟，得到溶液A；

步骤二、将氯金酸加入到步骤(一)得到的溶液A中混合均匀，再加入硝酸银溶液混合均匀，在温度为37℃-70℃水浴中加热0-4小时，得到溶液B；

步骤三、将步骤二得到的溶液B，保存在4℃条件下，得到酪蛋白-金银纳米簇。

优选地，所述步骤(一)中，酪蛋白浓度为40mg ml^-1，加热温度为65℃。

优选地，所述步骤(二)中，氯金酸和硝酸银的比例为8:1。

优选地，所述步骤(二)中，水浴加热的温度为65℃，加热时间为3小时。