[发明专利]一种花生转录因子AhbHLH10基因及其克隆与功能表达方法

说明书

本发明公开了一种花生转录因子AhbHLH10基因及其克隆与功能表达方法，涉及生物工程技术领域，其技术方案要点是，AhbHLH10基因开放阅读框为1503bp，共编码500个氨基酸；AhbHLH10基因的全长核苷酸序列是序列表中SEQUENCE LISTING 1，AhbHLH10基因的氨基酸序列是序列表中SEQUENCE LISTING2。该基因在花生对干旱胁迫的适应性中具有重要作用，能提高花生的抗旱性，增强花生的抗逆性。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，更具体地说，它涉及一种花生转录因子 AhbHLH10基因及其克隆与功能表达方法。

背景技术

我国是世界花生生产大国，花生种植面积居世界第二位，总产量占世界花生总产量的40％以上，居世界第一位。但是，花生产业的进一步发展受到旱灾的威胁。据统计，我国每年因干旱引起的花生减产达30％～50％。除产量下降外，干旱还有可能导致花生被黄曲霉毒素污染、品质下降等一系列后果。此外，随着粮食种植面积红线意识的增强，如何避免粮油挣地，在逆境胁迫下保持甚至增加花生的产量，成为科学研究的一个方向。

目前，利用转基因技术提高植物胁迫耐受能力的研究取得了巨大进步。当胁迫信号产生后，花生会启动一系列相应信号，最后传导到相关基因，启动该基因表达以协助花生适应或抵御逆境。转录因子是调控这些基因表达的重要因素，转录因子是指能够与真核基因启动子区域中顺式作用元件发生特异性作用的DNA结合蛋白，通过它们之间以及与其它相关蛋白之间的相互作用，调控基因的表达。

bHLH是存在于真核生中最广泛的一类转录因子家族，也是植物中最大转录因子家族之一，可以通过与靶基因中特定的基序结合来调控基因的表达.该转录因子包含保守的bHLH结构域，由一个位于N端的碱性区域和一个位于C 端的α螺旋结构组合而成。碱性区域是该转录因子与靶基因的识别区域，含有大量的碱性氨基酸，能与靶基因中保守的六核苷酸E-box结合,调控它们的表达，行使生物学功能(沈方圆等,2021)。2003年，拟南芥中鉴定出162个成员，被分为21个亚家族(Toeldo et al,2003)，2006年，Li等人(Li et al,2006)从水稻中鉴定到了167个成员，分为22个亚家族。在植物中，bHLH 是仅次于MYB类的第二大转录因子家族，其家族成员广泛参与植物的新陈代谢、活性成分合成、金属离子内稳态以及信号激素调节等重要生物学过程，还在植物的生长发育和环境应激中扮演着重要角色(王静等,2019)。到目前为止，尚未发现花生中bHLH10基因的研究报道。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的第一个目的在于提供一种花生转录因子AhbHLH10基因，第二个目的在于提供一种花生转录因子AhbHLH10基因的克隆与功能表达方法。

为实现上述第一个目的，本发明提供了一种花生转录因子AhbHLH10基因，所述AhbHLH10基因开放阅读框为1503bp，共编码500个氨基酸。

进一步地，所述AhbHLH10基因的全长核苷酸序列是序列表中SEQUENCE LISTING1，所述AhbHLH10基因的氨基酸序列是序列表中SEQUENCE LISTING 2。

为实现上述第二个目的，本发明提供了一种花生转录因子AhbHLH10基因的克隆与功能表达方法，其技术方案为：

一种花生转录因子AhbHLH10基因的克隆方法包括以下步骤：

S1、材料的准备与处理，包括花生种子的萌发、生长以及干旱胁迫处理；

S2、花生幼苗的DNA、RNA的提取和cDNA的合成；

S3、通过PCR进行全长AhbHLH10基因克隆；

S4、通过RT-PCR进行开放阅读框克隆。