[发明专利]一种用于外周血中NK细胞扩增的培养基及方法

权利要求书

1.一种用于外周血中NK细胞扩增的培养基，其特征在于，包括包被液及营养液两部分构成；所述包被液包括抗体NKG2D、CD2；所述营养液包括基础培养基、自体灭活血浆、一些化合物和细胞因子。

2.根据权利要求1所述的一种用于外周血中NK细胞扩增的培养基，其特征在于，所述营养液具体包括1640基础培养基、自体灭火血浆、L-谷氨酰胺、2-巯基乙醇、葡萄糖、酚红、IL-2、IL-15。

3.根据权利要求1所述的一种用于外周血中NK细胞扩增的培养基，其特征在于，所述的包被液中NKG2D、CD2的终浓度为1-10ug/mL；所述的营养液中的IL-2的终浓度为100-2000U/mL、IL-15的终浓度为5-100ng/mL、L-谷氨酰胺的终浓度为5-40mM、2-巯基乙醇的终浓度为5-100uM、葡萄糖的终浓度为1000-2500mg/L、酚红的终浓度为2-8mg/L、自体灭活血浆的体积分数为10%。

4.根据权利要求2所述的一种用于外周血中NK细胞扩增的培养基，其特征在于，所述包被液中，所述的NKG2D、CD2的终浓度比为1∶1；所述营养液中，所述的IL-2、IL-15、L-谷氨酰胺、2-巯基乙醇、葡萄糖、酚红的终浓度比为8∶1∶6∶0.2∶1000∶0.05。

5.根据权利要求1所述的一种用于外周血中NK细胞扩增的培养基，其特征在于，所述包被液中NKG2D的终浓度为5ug/mL最优、CD2的终浓度为5ug/mL最优；所述的营养液中IL-2的终浓度为1200U/mL最优、IL-15的终浓度为50ng/mL最优、L-谷氨酰胺的终浓度为20mM最优、2-巯基乙醇的终浓度为50uM最优、葡萄糖的终浓度为2000mg/L、最优、酚红的终浓度为6mg/L最优。

6.一种用于外周血中NK细胞扩增的方法，其特征在于，包括：如下步骤：

S1：包被：包被液包被需要使用的NK扩增培养瓶；

S2：培养：营养液扩增NK细胞。

7.根据权利要求6所述的一种用于外周血中NK细胞扩增的方法，其特征在于，提前一天使用包被液包被NK扩增瓶在4℃包被1天。

8.根据权利要求6所述的一种用于外周血中NK细胞扩增的方法，其特征在于，所述包被阶段的包被液包被的的第0天至第1天，不适用任何培养基；所述培养阶段使用营养液激活扩增NK细胞，从第1天至第14天，从第1天至第5天期间不换液；从第6天至第14天期间，隔1天对细胞进行计数并补加培养基。

9.根据权利要求6所述的一种用于外周血中NK细胞扩增的方法，其特征在于，单个核细胞接种量为1×10⁶-2×10⁶/ml，起始接种10ml。

10.根据权利要求6所述的一种用于外周血中NK细胞扩增的方法，其特征在于，所述外周血也包括脐带血。