[发明专利]一种用于外周血中NK细胞扩增的培养基及方法

说明书

本发明公开了一种用于外周血中NK细胞扩增的培养基及方法，包括以NKG2D与CD2为主的包被液及以1640基础培养基为主体、自体灭火血浆、L‑谷氨酰胺、2‑巯基乙醇、葡萄糖、酚红、IL‑2、IL‑15为添加剂的营养液两部分，本发明通过提供的NK细胞培养基及培养方法极大的降低了NK细胞的生产成本，且整个过程操作简单、扩增效率高、纯度良好。利用本发明，10天即可获得大量的高纯度的NK细胞，有利于NK细胞的大规模生产和应用。

技术领域

本发明涉及细胞制备技术领域，具体涉及一种用于外周血中NK细胞扩增的培养基及方法。

背景技术

NK细胞疗法，NK细胞疗法，是指通过向肿瘤患者回输经体外诱导培养的NK细胞，发挥直接或间接杀伤肿瘤细胞的作用，从而达到治疗肿瘤的目的。被广泛用于各种癌症的治疗，包括：血液系统肿瘤、神经母细胞瘤、卵巢肿瘤、横纹肌肉瘤、乳腺癌、胃癌等等，NK细胞疗法在这些病症中均取得了不错的临床治疗效果。大量研究数据表明，NK细胞疗法在提高恶性肿瘤患者免疫功能和生存质量方面都有极为不错的表现，可以与手术、放疗和化疗等传统治疗方案互补，在未来可能成为治疗癌症患者的新手段。

以NK细胞为基础的过继性免疫治疗需要大量的细胞，其应用范围为 患者每公斤体重需1×10 ⁶ —8×10 ⁷ CD3 - CD56 + NK细胞 (即一个80kg的成人需要至少8×10 ⁷ NK细胞，并需多次回输)。此外，NK细胞在外周血中所占比例很低（5-15%），因此在用于过继性免疫治疗之前，有必要对其进行扩增。

目前NK细胞临床试验大多数还处于比较早期的阶段，未来需要在现有技术的基础上，不断提高NK细胞治疗的有效性和安全性，优化生产（降低成本，缩短生产周期，优化工艺），扩大治疗范围。因此，进一步研究一种耗时短、易制备、低成本的体外NK细胞扩增的培养基和培养方法十分必要。

发明内容

发明目的：为降低NK生产成本，缩短NK细胞生产周期，优化NK细胞生产工艺，以NKG2D、CD2为激活剂，以1640基础培养基作为基础培养基；添加浓度为为1200U/mL的IL-2；浓度为50ng/mL的IL-15，浓度为20mM的L-谷氨酰胺，浓度为50uM的2-巯基乙醇的终，浓度为2000mg/L的葡萄糖，终浓度为6mg/L的酚红，体积分数为10%的自体灭活血浆形成本发明的培养基。

本发明的有益效果如下：

以本发明提供的NK细胞培养基及培养方法,操作简单、扩增效率高、纯度良好。利用本发明，10天即可获得大量的高纯度的NK细胞。

附图说明

图1是流式检测实施例及其对比组的CD3-CD56+阳性率的结果图；

图2是流式检测阴性组的CD3-CD56+阳性率的结果图；

图3是实施例及其对比组扩增曲线；

图4 实施例及其对比组扩增倍数柱状图。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好的理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述。

实施例

本实施例提供NK细胞扩增的培养基及方法。

本实施例采用的培养基包被液、刺激培养基和扩增培养基：

包被液中，NKG2D、CD2终浓度比为1∶1，具体配方为：DPBS磷酸缓冲液中加入终浓度为5ug/mL的NKG2D、终浓度为5ug/mL的CD2。