[发明专利]全能核酸酶的蛋白制备方法

权利要求书

1.一种全能核酸酶的蛋白制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1：首先使用信号肽制备SEQ ID No.1所示多肽氨基酸序列，然后将带有SEQ ID No.1所示多肽氨基酸序列的表达盒导入宿主细胞；

S2：培养S1中导入后的宿主细胞，并加入IPTG诱导表达SEQ ID No.1所示蛋白；其中培养条件为：培养至OD_600nm为0.6-1.0，加入1mM IPTG，28℃诱导表达；

S3：在S2步骤培养完成后，通过渗透休克法提取周质空间表达的SEQ ID No.1所示蛋白；其中渗透休克法具体操作步骤为：收集培养物于12000g离心1min，收集菌体，高渗溶液混匀10min，离心去上清，5mM MgCl₂溶液混匀10min，离心取上清即为蛋白上清溶液。

2.根据权利要求1所述的全能核酸酶的蛋白制备方法，其特征在于：所述步骤S1中,所述表达盒是指能够在宿主细胞中表达前文第二方面中所述DNA序列，该DNA序列不但可包括启动目的基因转录的启动子，还可包括终止目的基因转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子序列。

3.根据权利要求1所述的全能核酸酶的蛋白制备方法，其特征在于：所述信号肽采用OmpA、PelB、STII和DsbA中的一种。

4.根据权利要求1所述的全能核酸酶的蛋白制备方法，其特征在于：所述步骤S3中的高渗溶液关键组分为10％、15％、20％、25％、30％蔗糖溶液中的一种。进一步地，所述宿主细胞可为大肠杆菌，酵母，HEK293细胞，CHO细胞和昆虫细胞等。

5.根据权利要求1所述的全能核酸酶的蛋白制备方法，其特征在于：所述宿主细胞为大肠杆菌、酵母、HEK293细胞、CHO细胞、昆虫细胞中的一种。

6.根据权利要求5所述的全能核酸酶的蛋白制备方法，其特征在于：所述宿主细胞具体为大肠杆菌BL21(DE3)细胞。

7.根据权利要求1所述的全能核酸酶的蛋白制备方法，其特征在于：所述SEQ ID No.1氨基酸序列的核酸序列，其编码基因可为如下任一：

(a1)SEQ ID No.2所示的DNA分子，编码全能核酸酶，即SEQ ID No.1序列；

(a2)SEQ ID No.3所示的DNA分子，编码天然信号肽-全能核酸酶；

(a3)SEQ ID No.4所示的DNA分子，编码OmpA-全能核酸酶；

(a4)SEQ ID No.5所示的DNA分子，编码PelB-全能核酸酶；

(a5)SEQ ID No.6所示的DNA分子，编码STII-全能核酸酶；

(a6)SEQ ID No.7所示的DNA分子，编码DsbA-全能核酸酶；

(a7)在严格条件下与(a1)，或(a2)，或(a3)，或(a4)，或(a5)，或(a6)限定的DNA分子杂交且编码SEQ ID No.1所示多肽的DNA分子；

(a8)与(a1)，或(a2)，或(a3)，或(a4)，或(a5)，或(a6)，或(a7)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码SEQ ID No.1所示多肽的DNA分子。

8.一种如权利要求1-7任意一项所述的SEQ ID No.1所示多肽氨基酸序列或其相关生物材料的应用方法，其特征在于：

P1：细胞或细菌裂解液配合使用多肽氨基酸序列或其相关生物材料使用，去除粗提物中的核酸，降低溶液粘性；

P2：蛋白纯化过程中使用多肽氨基酸序列或其相关生物材料去除核酸分子，降低纯化过程溶液粘性；

P3：重组蛋白、病毒颗粒等生物制品使用多肽氨基酸序列或其相关生物材料去除DNA或RNA污染；

所述相关生物材料为SEQ ID No.1所示多肽的编码基因或含有所述编码基因的表达盒或重组载体或重组菌或转基因细胞系。