[发明专利]全能核酸酶的蛋白制备方法

说明书

本发明公开了一种全能核酸酶的制备方法，涉及生物制备领域，S1：首先使用信号肽制备SEQ ID No.1所示多肽氨基酸序列，然后将带有SEQ ID No.1所示多肽氨基酸序列的表达盒导入宿主细胞；S2：培养S1中导入后的宿主细胞，并加入IPTG诱导表达SEQ ID No.1所示蛋白；其中培养条件为：培养至OD_600nm为0.6‑1.0，加入1mM IPTG，28℃诱导表达；S3：在S2步骤培养完成后，通过渗透休克法提取周质空间表达的SEQ ID No.1所示蛋白；其中渗透休克法具体操作步骤为：收集培养物于12000g离心1min，收集菌体，高渗溶液混匀10min，离心去上清，5mM MgCl₂溶液混匀10min，离心取上清即为蛋白上清溶液。本发明采用周质空间分泌表达方法制备SEQ ID No.1所示多肽不经细胞裂解，避免包涵体处理，纯化工艺简单，降低生产成本。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种全能核酸酶(Ultra NuClease，NuC)的蛋白制备方法。

背景技术

全能核酸酶，又称广谱核酸酶，英文名称Benzonase Nuclease，一种来源于Serratia marcescen的非特异性核酸内切酶，可在链内任意核苷酸间进行切割，将核酸完全消化成3-8个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸，能够在非常广泛的条件下(6M urea，0.1MGuanidine HCl，0.4％Triton X-100，0.1％SDS，1mM EDTA，1mM PMSF)降解各种形式的(双链，单链，线状，环状，天然或变性)DNA和RNA，广泛用于去除生物制品中的核酸。本产品是经蛋白质工程技术改造的，不仅应用在科研研究中，作为培养细胞上清和细胞裂解液去粘度的首选酶制剂，去除核酸干扰提高后续蛋白纯化或功能研究；而且应用在疫苗工业、蛋白和多糖类制药工业，去除宿主残留核酸，大大降低疫苗和蛋白类产品核酸污染至皮克(pg)级别，提高制品生物功效。

目前，市售全能核酸酶(NuC)大多经包涵提纯化工艺制备，工艺复杂且复性过程不易控制。为了解决全能核酸酶(NuC)制备瓶颈问题，我们进行周质空间分泌表达纯化方式制备全能核酸酶(NuC)。

发明内容

为了解决现有全能核酸酶制备过程中存在的问题，本发明目的是提供一种全能核酸酶(NuC)蛋白制备方法，具备采用周质空间纯化，纯化工艺简单，且不经变性复性过程，蛋白产品活性高的优点。

为了实现以上目的，本发明采用了以下技术方案：

全能核酸酶的蛋白制备方法，包括以下步骤：

S1：首先使用信号肽制备SEQ ID No.1所示多肽氨基酸序列，然后将带有SEQ IDNo.1所示多肽氨基酸序列的表达盒导入宿主细胞；

S2：培养S1中导入后的宿主细胞，并加入IPTG诱导表达SEQ ID No.1所示蛋白；其中培养条件为：培养至OD600nm为0.6-1.0，加入1mM IPTG，28℃诱导表达；

S3：在S2步骤培养完成后，通过渗透休克法提取周质空间表达的SEQ ID No.1所示蛋白；其中渗透休克法具体操作步骤为：收集培养物于12000g离心1min，收集菌体，高渗溶液混匀10min，离心去上清，5mM MgCl₂溶液混匀10min，离心取上清即为蛋白上清溶液。

为了进一步优化本发明，可优先采用以下技术方案：

优选的，所述步骤S1中,所述表达盒是指能够在宿主细胞中表达前文第二方面中所述DNA序列，该DNA序列不但可包括启动目的基因转录的启动子，还可包括终止目的基因转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子序列。

优选的，所述信号肽采用OmpA、PelB、STII和DsbA中的一种。