[发明专利]一种神经递质γ-氨基丁酸荧光探针iGABASnFR的浮萍表达载体及其构建方法

权利要求书

1.一种神经递质γ-氨基丁酸荧光探针iGABASnFR的浮萍表达载体，其特征在于，其构建方法如下所述：

步骤一、根据iGABASnFR基因序列进行全基因合成；

步骤二、T-iGABASnFR的构建：利用iGABASnFR特异性引物，以全基因合成序列为模板，通过PCR技术获得带有特定酶切位点的荧光探针基因，并将其连接到T-载体上，所述T-载体采用pMD19-T质粒，所述iGABASnFR特异性引物如下所述：

iGABASnFR上游引物：CGCGGATCCGCGATGGAGACAGACACACTC，

iGABASnFR下游引物：GCTCTAGAGCCTAACGTGGCTTCTTCTG；

步骤三、最终载体的构建：对iGABASnFR和pCAMBIA-1301-35SN载体同时进行双酶切，所采用的限制性内切酶为BamHI和XbaI，对产物利用T4连接酶进行连接，经过PCR鉴定、双酶切鉴定和基因测序并比对结果为100％正确后，最终获得植物表达神经递质γ-氨基丁酸荧光探针iGABASnFR的载体。

2.一种神经递质γ-氨基丁酸荧光探针iGABASnFR的浮萍表达载体的构建方法，其特征在于，如下所述：

步骤一、根据iGABASnFR基因序列进行全基因合成；

步骤二、T-iGABASnFR的构建：利用iGABASnFR特异性引物，以全基因合成序列为模板，通过PCR技术获得带有特定酶切位点的荧光探针基因，并将其连接到T-载体上，所述T-载体采用pMD19-T质粒，所述iGABASnFR特异性引物如下所述：

iGABASnFR上游引物：CGCGGATCCGCGATGGAGACAGACACACTC，

iGABASnFR下游引物：GCTCTAGAGCCTAACGTGGCTTCTTCTG；

步骤三、最终载体的构建：对iGABASnFR和pCAMBIA-1301-35SN载体同时进行双酶切，所采用的限制性内切酶为BamHI和XbaI，对产物利用T4连接酶进行连接，经过PCR鉴定、双酶切鉴定和基因测序并比对结果为100％正确后，最终获得植物表达神经递质γ-氨基丁酸荧光探针iGABASnFR的载体。