[发明专利]融合基因RIL-7联合CCL19重组溶瘤牛痘病毒及其在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

本发明公开了融合基因RIL‑7联合CCL19重组溶瘤牛痘病毒及其在制备抗肿瘤药物中的应用。融合基因RIL‑7联合CCL19重组溶瘤牛痘病毒VV‑RIL‑7‑CCL19，是在牛痘病毒母本基因组(基因组序列以GenBank:AY243312.1为基准)的第81001bp位置之后插入融合基因RIL‑7、趋化因子CCL19及调控元件的基因序列；其中，所述插入牛痘病毒母本基因组中的基因序列见S1或S1’。本发明在促进抗肿瘤免疫应答的同时，可避免潜在的细胞因子风暴等不良反应，同时能促进T细胞等免疫细胞趋化至肿瘤微环境，进一步增强重组溶瘤病毒的抗肿瘤效应。

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及融合基因RIL-7联合CCL19重组溶瘤牛痘病毒及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

1、免疫治疗日益成为肿瘤治疗的重要手段

总体而言，目前肿瘤罹患率和死亡率居高不下。现有的肿瘤治疗手段包括手术、放疗、化疗、靶向治疗、中医等传统医学治疗手段等，然而其疗效亟待提升。

肿瘤病理过程中，肿瘤细胞与抗肿瘤免疫的相互作用，共同决定着肿瘤的发生和进展。肿瘤微环境中免疫细胞(尤其是抗肿瘤免疫的主力军T细胞)的数量和功能状态是影响肿瘤免疫治疗效果和患者转归的关键要素之一。依据肿瘤浸润T细胞的存在与否，将肿瘤分为“冷肿瘤”(即肿瘤组织内部和外周均缺乏T细胞等免疫细胞)和“热肿瘤”(即肿瘤组织内有大量免疫细胞浸润，T细胞等免疫细胞处于激活或耗竭状态)；依据肿瘤微环境中免疫细胞的数量和功能，可将免疫炎症型(即“热肿瘤”)、免疫豁免型(是指T细胞等免疫细胞仅能到达肿瘤细胞的外围基质，而不能迁移到肿瘤组织内)和免疫沙漠型(即“冷肿瘤”)。如果使得肿瘤微环境中具有数量足够、功能强大和作用持久的T细胞等免疫细胞，那将极大提高肿瘤的治疗效果。

由此，免疫治疗为肿瘤医治提供了新手段，也为肿瘤患者带来了新希望。肿瘤免疫治疗按技术原理可分为主动免疫治疗、被动免疫治疗以及在此基础上的复合人工手段等。主动免疫治疗是指通过提供肿瘤抗原，启动机体针对肿瘤细胞的主动免疫攻击，例如肿瘤疫苗等手段。被动免疫治疗是指通过抗肿瘤免疫应答产物的输注，使得患者被动获得抗肿瘤能力，例如过继输注T细胞、NK细胞等细胞治疗手段，以及输注PD-1抗体等体液免疫治疗手段。研究者还通过人工手段构建新型肿瘤治疗手段，例如将编码识别肿瘤抗原的抗体可变区和T细胞激活所需的第一信号及第二信号活化区的基因组合后导入T细胞，构建嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)等。

2、肿瘤免疫循环各个环节受阻是严重制约肿瘤免疫治疗效果的瓶颈

机体内抗肿瘤免疫效应的实现有赖于持续的肿瘤免疫循环。肿瘤免疫循环包括：①肿瘤细胞被杀死，释放肿瘤抗原；②抗原提呈细胞识别、摄取、加工处理肿瘤抗原；③抗原提呈细胞迁移至邻近淋巴组织器官；④抗原提呈细胞将肿瘤抗原提呈给抗原特异性T细胞，并使之活化、增殖分化为效应性T细胞；⑤效应性T细胞从淋巴组织器官迁移至肿瘤组织；⑥效应性T细胞杀死肿瘤细胞，释放更多肿瘤抗原。这些环节如能周而复始并持续放大即可实现有效的抗肿瘤效应。临床肿瘤治疗或临床实验研究表明，上述免疫治疗技术手段可不同程度地提高肿瘤治疗效果，但又受到严重制约。例如，PD-1单抗的总体有效率约为10％-30％左右，仍需要进一步提升疗效。诸多免疫治疗手段作用于肿瘤免疫循环的环节较为单一，往往顾此失彼。突破性地提升肿瘤免疫治疗效果的创新在于如何有效维持肿瘤免疫循环的持续性。

3、溶瘤病毒的概念、疗效和不足之处