[发明专利]利用双链核酸检测器进行靶核酸检测的方法

权利要求书

1.一种检测样品中靶核酸的方法，所述方法包括将样品与CRISPR效应蛋白、gRNA(指导RNA)和核酸检测器接触，所述gRNA包括与所述CRISPR效应蛋白结合的区域和与靶核酸杂交的导向序列；检测由CRISPR效应蛋白切割所述核酸检测器产生的可检测信号，从而检测靶核酸，所述核酸检测器不与所述gRNA杂交；所述核酸检测器包括可以形成双链互补配对结构的核酸；所述CRISPR效应蛋白选自Mad7或LbCas12a。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸检测器的核酸为单链核酸，所述单链核酸具有反向重复序列，所述反向重组序列可以通过碱基互补配对形成双链互补配对结构；或者，所述核酸检测器的核酸为双链核酸。

3.一种用于检测样品中靶核酸的系统或组合物或试剂盒，所述系统或组合物或试剂盒包括权利要求1-2任一权利要求中的CRISPR效应蛋白、gRNA(指导RNA)和核酸检测器。

4.权利要求3所述的系统或组合物或试剂盒在检测样品中靶核酸的应用。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括样品与核酸检测组合物接触，所述核酸检测组合物包括Cas蛋白、gRNA和单链核酸检测器；所述gRNA包括与所述Cas蛋白结合的区域和与靶核酸上的靶序列杂交的导向序列；检测由Cas蛋白切割单链核酸检测器产生的可检测信号，从而检测靶核酸；所述单链核酸检测器不与所述gRNA杂交；

所述核酸检测组合物选自第一核酸检测组合物、第二核酸检测组合物、和第三核酸检测组合物的任意一种、任意两种或三种；

所述第一核酸检测组合物包括Cas12i，可以结合Cas12i以及与靶核酸上的第一靶序列杂交的第一gRNA，和第一单链核酸检测器；

所述第二核酸检测组合物包括Cas12b，可以结合Cas12b以及与靶核酸上的第二靶序列杂交的第二gRNA，和第二单链核酸检测器；

所述第三核酸检测组合物包括Cas12j，可以结合Cas12j以及与靶核酸上的第三靶序列杂交的第三gRNA，和第三单链核酸检测器；

所述第一单链核酸检测器的核酸由两个连续的核苷酸组成；

所述第二单链核酸检测器的核酸结构为核酸类似物，所述核酸类似物为锁核酸(LNA)；

所述第三单链核酸检测器的核酸结构为核酸类似物，所述核酸类似物为2’氧甲基RNA。

6.一种用于检测样品中靶核酸的试剂或系统或试剂盒，所述试剂或系统或试剂盒包括CRISPR效应蛋白、gRNA(指导RNA)和核酸检测器，所述gRNA包括与所述CRISPR效应蛋白结合的区域和与靶核酸杂交的导向序列，所述核酸检测器不与所述gRNA杂交；所述核酸检测器包括可以形成双链互补配对结构的核酸；所述CRISPR效应蛋白选自Mad7或LbCas12a；所述试剂或系统或试剂盒还包括选自权利要求5中的第一核酸检测组合物、第二核酸检测组合物和第三核酸检测组合物中的任意一种、任意两种或三种。

7.权利要求6所述的试剂、系统或试剂盒在检测样品中靶核酸的应用。

8.根据权利要求1或2或5所述的方法，权利要求3或6所述的试剂或系统或试剂盒，权利要求4或7所述的应用；其特征在于，所述可检测信号通过以下方式实现：基于视觉的检测，基于凝胶电泳检测，基于传感器的检测，颜色检测，基于金纳米颗粒的检测，荧光偏振，荧光信号检测，电化学检测和基于半导体的检测。

9.根据权利要求1或2或5所述的方法，权利要求3或6所述的试剂或系统或试剂盒，权利要求4或7所述的应用；其特征在于，所述样品包括来源于病毒、细菌、微生物、土壤、水源、人体、动物、植物等的样品。

10.根据权利要求1或2或5所述的方法，权利要求3或6所述的试剂或系统或试剂盒，权利要求4或7所述的应用；其特征在于，所述靶核酸来源于病毒、细菌、微生物、土壤、水源、人体、动物、植物等样品。