[发明专利]一种脑脊液中新烟碱类杀虫剂及其代谢产物的检测方法

权利要求书

1.一种脑脊液中新烟碱类杀虫剂及其代谢产物的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

向脑脊液中加入稳定同位素标记的内标物后再与甲酸水溶液混合得到混合液；

将混合液通过固相萃取小柱，然后使用甲醇洗脱，再将洗脱液使用甲醇水溶液进行复溶；所述固相萃取小柱为Bond Elut Plexa 3 cc；

对复溶后的溶液进行高效液相三重四级杆串联质谱法检测；

高效液相三重四级杆串联质谱法检测条件为：选用Waters ACQUITY BEH C18为高效液相色谱柱，所述高效液相色谱柱的长度为100 mm、内径为2.1 mm、填料颗粒直径为1.7 μm；采用正负离子模式收集数据，串联质谱条件采用电喷雾电离，正离子模式检测条件为：碰撞气10 psi，气帘气35 psi，离子喷雾电压4000 V，离子源温度650 ℃，离子源气体1和2 均为70 psi；负离子模式检测条件为：碰撞气8 psi，气帘气30 psi，离子喷雾电压-4500 V，离子源温度600 ℃，离子源气体1和2 分别为70 psi和50 psi；

采用梯度洗脱程序进行洗脱，梯度洗脱程序具体为：

时刻0min：采用体积比为5:95的乙腈和甲酸水溶液组成的混合液做流动相，流速为0.35mL/min；

时刻0.6min：采用体积比为5:95的乙腈和甲酸水溶液组成的混合液做流动

相，流速为0.35mL/min；

时刻4min：采用体积比为99:1的乙腈和甲酸水溶液组成的混合液做流动相，流速为0.35mL/min；

时刻5min：采用体积比为99:1的乙腈和甲酸水溶液组成的混合液做流动相，

流速为0.35mL/min；

时刻5.5min：采用体积比为5:95的乙腈和甲酸水溶液组成的混合液做流动相，流速为0.35mL/min；

时刻6.5min：采用体积比为5:95的乙腈和甲酸水溶液组成的混合液做流动

相，流速为0.35mL/min；

所述甲酸水溶液的体积浓度为0.003~0.008%；

所述新烟碱类杀虫剂及其代谢物包括啶虫脒、去甲基啶虫脒、吡虫啉、5-羟基吡虫啉、烯烃吡虫啉、噻虫嗪、N-去甲基噻虫嗪、噻虫啉、噻虫啉酰胺、烯啶虫胺、噻虫胺、氟啶虫酰胺、氯噻啉、氟啶虫胺腈和6-氯烟酸；

啶虫脒、去甲基啶虫脒、吡虫啉、5-羟基吡虫啉、噻虫嗪、N-去甲基噻虫嗪、噻虫啉、噻虫啉酰胺、烯啶虫胺、噻虫胺、氟啶虫酰胺和氯噻啉采用正离子模式采集数据；烯烃吡虫啉、氟啶虫胺腈和6-氯烟酸采用负离子模式采集数据；

向脑脊液中加入稳定同位素标记的内标物后再与甲酸水溶液混合得到混合液具体为：向250~300 μL的脑脊液中加入30~45ng的稳定同位素标记的内标物再与1~2ml体积浓度为1~3%的甲酸水溶液混合得到混合液；

所述稳定同位素标记的内标物包括¹³C₃-¹⁵N₂-烯啶虫胺，¹³C₄-¹⁵N-噻虫嗪，D₄-吡虫啉，¹³C₆-啶虫脒，¹³C₆-噻虫啉，¹³C₄-¹⁵N-噻虫胺，¹⁸O-¹⁵N-氟啶虫酰胺，D₄-N-去甲基噻虫嗪，¹³C₆-噻虫啉酰胺，D₄-氯噻啉，¹³C₂-¹⁵N-去甲基啶虫脒，¹³C₆-6-氯烟酸，D₃-¹³C₂-¹⁵N₂-氟啶虫胺腈，¹³C-¹⁵N₂-烯烃吡虫啉，¹³C-¹⁵N₂-5-羟基吡虫啉的混合物；

将混合液通过固相萃取小柱，然后使用甲醇洗脱，再将洗脱液使用甲醇水溶液进行复溶具体为：

将甲醇、氢氧化铵混合后，得到活化液，再利用活化液对固相萃取小柱进行活化；

用水淋洗活化后的固相萃取小柱，然后再将混合液通过固相萃取小柱；

将甲醇、甲酸与水混合后冲洗固相萃取小柱，负压干燥后，使用甲醇洗脱，将洗脱液氮气吹干，再用甲醇水溶液进行复溶；

甲醇与氢氧化铵的体积比为(15~20) :1；甲醇、甲酸与水的体积比为(4.5~5.5): (0.5~1.5):(42~46)。