[发明专利]适配体纳米比色生物传感器及其应用和产品、大肠杆菌的检测方法

权利要求书

1.一种适配体纳米比色生物传感器，其特征在于，包括适配体和纳米材料；

所述适配体吸附在纳米材料上；

所述适配体包括具有如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQID NO.5所示核苷酸序列的核酸中的至少一种；

所述纳米材料具有类过氧化物酶活性，适配体吸附在纳米材料上时，类过氧化物酶活性增强。

2.根据权利要求1所述的适配体纳米比色生物传感器，其特征在于，所述纳米材料包括蛋白金纳米簇、磁性纳米粒子或石墨烯纳米粒子。

3.根据权利要求2所述的适配体纳米比色生物传感器，其特征在于，所述蛋白金纳米簇的制备方法包括如下步骤：

将牛血清白蛋白与氯金酸混合，调节溶液pH至碱性，加热后制备得到蛋白金纳米簇。

4.根据权利要求3所述的适配体纳米比色生物传感器，其特征在于，所述加热包括水浴加热；

优选地，所述加热的温度为95～100℃，优选为100℃；

优选地，所述加热的时间为2～4min，优选为3min。

5.权利要求1-4任一项所述的适配体纳米比色生物传感器在制备诊断脓毒症的产品中的应用。

6.一种诊断脓毒症的产品，其特征在于，包括权利要求1-4任一项所述的适配体纳米比色生物传感器。

7.一种大肠杆菌的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

a.将适配体和蛋白金纳米簇混合，进行第一次孵育，然后加入已知浓度的大肠杆菌，进行第二次孵育，再加入过氧化氢和3,3',5,5'-四甲基联苯胺，进行第三次孵育，之后在652nm波长下检测吸光度，得到大肠杆菌浓度与吸光度的关系；

b.将适配体和蛋白金纳米簇混合，进行第一次孵育，然后加入待测样品，进行第二次孵育，再加入过氧化氢和3,3',5,5'-四甲基联苯胺，进行第三次孵育，之后在652nm波长下检测吸光度，根据a步骤中得到的肠杆菌浓度与吸光度的关系计算待测样品中大肠杆菌的浓度；

所述适配体包括具有如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQID NO.5所示核苷酸序列的核酸中的至少一种。

8.根据权利要求7所述的大肠杆菌的检测方法，其特征在于，所述第一次孵育的溶液中适配体的浓度为1.4～1.6μM，优选为1.5μM；

优选地，所述第一次孵育的溶液中蛋白金纳米簇的浓度为0.005～0.015mg/mL，优选为0.010mg/mL；

优选地，所述第一次孵育的时间为20～40min，优选为30min。

9.根据权利要求7所述的大肠杆菌的检测方法，其特征在于，所述已知浓度的大肠杆菌或待测样品的加入量与第一次孵育的溶液的体积比为1:1～1:20，优选为1:9；

优选地，所述第二次孵育的时间0.5～2h，优选为1h。

10.根据权利要求7所述的大肠杆菌的检测方法，其特征在于，所述第三次孵育的溶液中过氧化氢的浓度为300～500mM,优选为400mM；

优选地，所述第三次孵育的溶液中3,3',5,5'-四甲基联苯胺的浓度为500-600μM，优选为500μM；

优选地，所述第三次孵育的溶液的pH为3～4，优选为4；

优选地，所述第三次孵育的温度为20～40℃，优选为30℃；

优选地，所述第三次孵育的时间为40～50min，优选为40min；

优选地，所述第三次孵育的溶液与所述第二次孵育的溶液的体积比为1:2～2:1，优选为1:1。