[发明专利]适配体纳米比色生物传感器及其应用和产品、大肠杆菌的检测方法

说明书

本发明提供了一种适配体纳米比色生物传感器及其应用和产品、大肠杆菌的检测方法，涉及生物检测技术领域。本发明提供的适配体纳米比色生物传感器，包括纳米材料和吸附在纳米材料上的适配体，其中纳米材料具有类过氧化物酶活性，适配体为具有特定核苷酸序列的核酸，能够特异性识别并结合大肠杆菌。本发明的适配体纳米比色生物传感器特异性好，灵敏度高，能够应用于大肠杆菌的检测以及制备诊断脓毒症的产品中。本发明提供的大肠杆菌的检测方法，简单方便，能够快速准确的实现对大肠杆菌的定性定量检测，减少大肠杆菌的检测时间，降低检测成本。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其是涉及一种适配体纳米比色生物传感器及其应用和产品、大肠杆菌的检测方法。

背景技术

脓毒症是机体对感染产生的炎症反应失调而引起生理学和器官功能损害的临床综合征，也是危重病患者的首要死因。脓毒症多由细菌感染引起，而腹腔细菌感染尤为常见。在重症加强护理病房(ICU)，腹腔感染导致的脓毒症患者占63％，其中大肠杆菌(E.coli)为主的革兰氏阴性细菌导致的腹膜炎性脓毒症占25-71％。

目前传统的大肠杆菌检测方法过程须经过预增菌、选择性增菌、分离培养、生理生化鉴定及血清型鉴定等步骤，整个过程繁琐耗时(3-7天)。而且在脓毒症的样品中微生物种类相对复杂，致病菌数量可能相对较少，即使经过选择性增菌培养也可能发生漏检现象。上述传统病原菌的分离鉴定较为费时耗力，检测灵敏度差，较低的检测效率将严重地耽误病情并错过最佳治疗期限，虽然如此但其仍是临床医学细菌鉴定的主要途径。一些新型检测方法，如：ELISA法、PCR方法以及生物传感器法对大肠杆菌的检测灵敏度高，然而它们仍需要较长的检测时间、昂贵的仪器以及专业的技术人员，所以只在少数大医院使用。因此，建立灵敏、快速且简便的检测方法对于脓毒症中大肠杆菌的防控显得尤为重要。

适配体纳米比色传感器近年来吸引了研究人员的广泛关注，该技术不仅发挥了比色法简便快速灵敏的优点，还充分利用了适配体针对目标物极高的亲和性和特异性。适配体是一种短的单链核酸序列，能够以类似抗体的方式结合目标分子。到目前为止，已经产生了数以千计的可用于多种靶点的适配体，靶点可以是小金属离子、有机分子、多肽、蛋白质、病毒、细菌、整个细胞，甚至活体动物体内的靶标。与传统的细菌检测方法相比，基于适配体的检测方法具有更高的灵敏性、特异性及快速性。然而，适配体纳米比色传感器还未用于脓毒症中细菌的检测研究中。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种适配体纳米比色生物传感器。

本发明的第二目的在于提供一种适配体纳米比色生物传感器在制备诊断脓毒症的产品中的应用。

本发明的第三目的在于提供一种诊断脓毒症的产品。

本发明的第四目的在于提供大肠杆菌的检测方法，以解决上述问题的至少一种。

第一方面，本申请提供了一种适配体纳米比色生物传感器，包括适配体和纳米材料；

所述适配体吸附在纳米材料上；

所述适配体包括具有如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示核苷酸序列的核酸中的至少一种；

所述纳米材料具有类过氧化物酶活性，适配体吸附在纳米材料上时，类过氧化物酶活性增强。

作为进一步技术方案，所述纳米材料包括蛋白金纳米簇、磁性纳米粒子或石墨烯纳米粒子。

作为进一步技术方案，所述蛋白金纳米簇的制备方法包括如下步骤：

将牛血清白蛋白与氯金酸混合，调节溶液pH至碱性，加热后制备得到蛋白金纳米簇。

作为进一步技术方案，所述加热包括水浴加热；