[发明专利]一种氨磷汀抗辐射损伤相关基因筛选与功能分析方法

说明书

本发明属于辐射防护技术领域，涉及一种氨磷汀抗辐射损伤相关基因筛选与功能分析方法。所述的方法包括如下步骤：(1)注射与辐照；(2)RNA提取；(3)建立测序用cDNA文库；(4)高通量测序；(5)测序结果分析。利用本发明的氨磷汀抗辐射损伤相关基因筛选与功能分析方法，能够筛选出氨磷汀抗辐射损伤相关基因，并进行功能分析，从而从基因层面揭示氨磷汀抗辐射机制。

技术领域

本发明属于辐射防护技术领域，涉及一种氨磷汀抗辐射损伤相关基因筛选与功能分析方法。

背景技术

随着核技术在生命科学、医学等方面应用的迅速发展，辐射对人类的影响日益增加。辐射可对机体产生严重的损伤，引起机体的代谢、形态和功能发生改变，导致机体免疫力降低，而且还可能引起基因突变或癌变。

目前，研究已发现了一些具有辐射防护作用的药物，如雌二醇、炔雄三醇、氨磷汀等，其中氨磷汀(amifostine)是目前临床上使用最为普遍且效果较为明确的一种抗辐射药物，在肿瘤放疗中被广泛使用。有很多人对氨磷汀的辐射防护机制进行研究，但仅停留在细胞水平，缺乏更深层次的研究。

随着后基因组时代的到来，转录组学、蛋白质组学、代谢组学等各种组学技术相继出现。其中，转录组研究是基因功能及结构研究的基础和出发点，目前在寻找生物标志物或者探寻发病新机制及制定个性化治疗方案等诸多方面有着重要应用。RNA测序(RNA-Seq)是近年来发展较为成熟的高通量测序技术，作为转录组分析技术的新手段，具有快捷分析、高分辨率等优势，可以应用其从基因层面对氨磷汀的作用机制提供一些解释。

发明内容

本发明的目的是提供一种氨磷汀抗辐射损伤相关基因筛选与功能分析方法，以能够筛选出氨磷汀抗辐射损伤相关基因，并进行功能分析，从而从基因层面揭示氨磷汀抗辐射机制。

为实现此目的，在基础的实施方案中，本发明提供一种氨磷汀抗辐射损伤相关基因筛选与功能分析方法，所述的方法包括如下步骤：

(1)注射与辐照：对多只大鼠分别腹腔注射氨磷汀后，对部分大鼠分别进行辐照；

(2)RNA提取：分别摘取每只未辐照的大鼠与每只辐照后的大鼠的脏器并分别进行组织RNA提取；

(3)建立测序用cDNA文库：由步骤(2)提取的RNA分别建立每只未辐照的大鼠与每只辐照后的大鼠的测序用cDNA文库；

(4)高通量测序：对步骤(3)建立的每只未辐照的大鼠与每只辐照后的大鼠的测序用cDNA文库分别进行高通量测序；

(5)测序结果分析：根据步骤(4)的高通量测序结果，计算每只未辐照的大鼠与每只辐照后的大鼠的不同基因的表达量，筛选出未辐照的大鼠与辐照后的大鼠的差异表达基因，并寻找差异表达基因的富集通路，分析差异表达基因的功能。

在一种优选的实施方案中，本发明提供一种氨磷汀抗辐射损伤相关基因筛选与功能分析方法，其中所述的大鼠为SD大鼠。

在一种优选的实施方案中，本发明提供一种氨磷汀抗辐射损伤相关基因筛选与功能分析方法，其中步骤(1)中，每只大鼠的氨磷汀注射剂量为100-200mg/kg。

在一种优选的实施方案中，本发明提供一种氨磷汀抗辐射损伤相关基因筛选与功能分析方法，其中步骤(1)中，每只大鼠在注射氨磷汀后20-60分钟进行辐照，辐照剂量为10-30Gy。

在一种优选的实施方案中，本发明提供一种氨磷汀抗辐射损伤相关基因筛选与功能分析方法，其中步骤(2)中，所述的脏器为大鼠胸部肺脏。

在一种优选的实施方案中，本发明提供一种氨磷汀抗辐射损伤相关基因筛选与功能分析方法，其中步骤(3)中，对步骤(2)提取的RNA富集mRNA，将RNA片段化，反转录合成cDNA并进行末端修复，连接产物通过特异的引物进行桥式PCR扩增，从而建立测序用cDNA文库。