[发明专利]水解白酒丢糟的混合菌酶液的制备方法

权利要求书

1.水解白酒丢糟的混合菌酶液的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

a.分别从窖泥、丟糟、酒厂周边环境土壤中取样，用以白酒丢糟为碳源的筛选培养基进行筛选富集，经分离纯化后得到菌样；

b.将步骤a得到的菌样活化后进行发酵培养，然后将其浸提，抽滤，离心后得到菌酶液A，将菌酶液A用于白酒丟糟的酶解，筛选得到H菌，经发酵制得H菌酶液，经IUPAC公布的滤纸酶活力的测定方法，H菌酶液酶活为5.0-5.8IU/ml；

c.分别从窖泥、丟糟、酒厂周边环境土壤中取样，用以H菌酶液酶解后的白酒丟糟为碳源的筛选培养基进行筛选富集，经分离纯化后得到菌样；

d.将步骤c得到的菌样活化后进行发酵培养，然后将其浸提，抽滤，离心后得到菌酶液B，将菌酶液B与H菌酶液按1∶5-15的体积比混合后用于白酒丟糟的酶解，筛选得到L菌，经发酵制得L菌酶液，经IUPAC公布的滤纸酶活力的测定方法，L菌酶液酶活为0.70-0.78IU/ml；

e.分别从窖泥、丟糟、酒厂周边环境土壤中取样，用以H菌酶液和L菌酶液共同酶解的白酒丟糟为碳源的筛选培养基进行筛选富集，经分离纯化后得到菌样；

f.将步骤e得到的菌样活化后进行发酵培养，然后将其浸提，抽滤，离心后得到菌酶液C，将菌酶液C、H菌酶液和L菌酶液按1∶10-20:1-10的体积比混合后用于白酒丟糟的酶解，筛选得到M菌，经发酵制得M菌酶液，经IUPAC公布的滤纸酶活力的测定方法，M菌酶液酶活为0.45-0.49IU/ml；

g.将H菌酶液、L菌酶液和M菌酶液按照15-17∶2-4∶1的体积比混合均匀，得到提高白酒丢糟水解性能的混合菌酶液；

步骤a中，所述以白酒丢糟为碳源的筛选培养基的主要成分为：白酒丢糟1-1.3％，(NH₄)₂SO₄0.3-0.5％，MgSO₄0.04-0.06％，KH₂PO₄0.1-0.15％，蛋白胨0.1-0.15％，NaCl0.05-0.07％；

步骤c中，所述以H菌酶解后的白酒丟糟为碳源的筛选培养基的主要成分为：经H菌酶液酶解后的白酒丢糟1-1.3％，(NH₄)₂SO₄0.3-0.5％，MgSO₄0.04-0.06％，KH₂PO₄0.08-0.12％，蛋白胨0.1-0.15％，NaCl0.05-0.07％；

步骤e中，将H菌酶液和L菌酶液按3-5∶1的体积比混合后共同酶解白酒丟糟，所述以H菌酶液和L菌酶液共同酶解的白酒丟糟为碳源的筛选培养基的主要成分为：经H菌酶液和L菌酶液共同酶解的白酒丟糟1-1.3％，(NH₄)₂SO₄0.3-0.5％，MgSO₄0.04-0.06％，KH₂PO₄0.1-0.15％，蛋白胨0.1-0.15％，NaCl0.05-0.07％。

2.根据权利要求1所述的水解白酒丢糟的混合菌酶液的制备方法，其特征在于：步骤b、d、f任一项中，采用固体发酵培养基进行发酵培养，活化菌样的接种量为固体发酵培养基的9-11％。

3.根据权利要求2所述的水解白酒丢糟的混合菌酶液的制备方法，其特征在于：所述固体发酵培养基由白酒丟糟与盐溶液按照质量体积比1∶1.3-1.7g/ml混合，所述盐溶液的成分为：(NH₄)₂SO₄0.9-1.1％，NaNO₃1.9-2.1％、KH₂PO₄0.9-1.1％、CaCl₂0.1-0.15％、Mg_SO₄0.1-0.15％，豆饼粉0.9-1.1％，其余为水。

4.根据权利要求1所述的水解白酒丢糟的混合菌酶液的制备方法，其特征在于：步骤b、d、f任一项中，浸提的方法为：将发酵后的菌样与pH4.8-5.2的柠檬酸缓冲液按1∶9-11g/ml的质量体积比混合后浸提。