[发明专利]水解白酒丢糟的混合菌酶液的制备方法

说明书

本发明公开了一种水解白酒丢糟的混合菌酶液的制备方法，属于白酒丢糟再利用领域。水解白酒丢糟的混合菌酶液的制备方法，通过筛选、富集、培养，获得对丢糟降解具有协同作用的H菌(里氏木霉属)、L菌(黑曲霉属)和M菌(毛霉属)，并通过发酵分别制得将H菌酶液、L菌酶液和M菌酶液。通过三种菌酶液的配合使用，可以增强酶系间的配伍，达到相互促进的作用，从而进一步的提高白酒丢糟的水解效果，同时显著降低酶液用量，进而降低酶解工艺的成本，本发明可有效解决现有现有菌株对白酒丢糟的水解效果较差，酶解工艺成本较高的问题。

技术领域

本发明属于白酒丢糟再利用领域，涉及一种高效水解白酒丢糟的混合菌酶液的制备方法。

背景技术

白酒丢糟是酒糟的一种，是谷物等经过反复发酵及蒸馏提取酒精后营养贫瘠的谷物外壳及残留渣体，水分、纤维素含量高，但粗蛋白、粗脂肪等含量较酒糟低，丢糟中纤维素本身是极具开发潜力的物质，经水解后可转化为葡萄糖单糖。但由于丢糟的纤维素，半纤维、木质素这3种大分子物质构成致密结构——木质纤维素，组成了抗水解屏障，并且纤维素被半纤维素及木质素包裹，使得纤维素难以被水解。

2018年11月30日的专利CN108913604A公开了一种白酒丢糟的高效水解菌株的筛选方法，包括：菌种库中相关水解白酒丢糟可能水解白酒丢糟的有效真菌、从白酒丢糟堆放环境中直接分离培养真菌；将筛选出来的真菌以白酒丢糟中难以水解的单一聚合物为唯一碳源，依次通过羧甲基纤维素钠—刚果红培养基、PDA—苯胺蓝培养基、木聚糖—刚果红培养基进行初步筛选；将菌株在以白酒丢糟为唯一营养物质的丢糟液中培养，判断菌株对丢糟水解能力；将复合菌组在白酒丢糟液中进行酶活力测试，筛选具有协同作用、酶活力高的菌组即为高效复合水解菌组。但该方法所采用的培养基较多，方法较为复杂；其以白酒丢糟中难以水解的单一聚合物为唯一碳源，只能对白酒丢糟进行基本的水解，其水解性能较差。

有研究表明纤维素主要由成千上万个D-吡喃型葡萄糖残基经β-1，4糖苷键联结而成的大分子链状聚合体，从而使丢糟的转化受到极大的限制。且丢糟酸度大，水分含量较高，极易腐败变质造成环境污染。现有菌株对白酒丢糟的水解效果较差，酶解工艺成本较高，因此研究一种能高效水解白酒丢糟的方法很有必要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是现有菌株对白酒丢糟的水解效果较差，酶解工艺成本较高的问题。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：水解白酒丢糟的混合菌酶液的制备方法，包括如下步骤：

a.分别从窖泥、丟糟、酒厂周边环境土壤中取样，用以白酒丢糟为碳源的筛选培养基进行筛选富集，经分离纯化后得到菌样；

b.将步骤a得到的菌样活化后进行发酵培养，然后将其浸提，抽滤，离心后得到菌酶液A，将菌酶液A用于白酒丟糟的酶解，筛选得到H菌(里氏木霉属)，经发酵制得H菌酶液，H菌酶液酶活为5.0-5.8IU/ml；

c.分别从窖泥、丟糟、酒厂周边环境土壤中取样，用以H菌酶液酶解后的白酒丟糟为碳源的筛选培养基进行筛选富集，经分离纯化后得到菌样；

d.将步骤c得到的菌样活化后进行发酵培养，然后将其浸提，抽滤，离心后得到菌酶液B，将菌酶液B与H菌酶液按1∶5-15的体积比混合后用于白酒丟糟的酶解，筛选得到L菌(黑曲霉属)，经发酵制得L菌酶液，L菌酶液酶活为0.70-0.78IU/ml；

e.分别从窖泥、丟糟、酒厂周边环境土壤中取样，用以H菌酶液和L菌酶液共同酶解的白酒丟糟为碳源的筛选培养基进行筛选富集，经分离纯化后得到菌样；

f.将步骤e得到的菌样活化后进行发酵培养，然后将其浸提，抽滤，离心后得到菌酶液C，将菌酶液C、H菌酶液和L菌酶液按1∶10-20:1-10的体积比混合后用于白酒丟糟的酶解，筛选得到M菌(毛霉属)，经发酵制得M菌酶液，M菌酶液酶活为0.45-0.49IU/ml；