[发明专利]一种无血清培养细胞的方法

权利要求书

1.一种无血清培养细胞的方法，其特征在于，依次包括如下步骤：

(1)通过细胞计数板或细胞计数仪测定预培养细胞悬液中的细胞数，离心细胞悬液，细胞经离心聚集在离心管底部后，吸除上清液；

(2)将生物材料水溶液与细胞混合，吹打细胞直至与生物材料水溶液混合均匀，细胞均匀分散在生物材料水溶液中形成生物材料包裹细胞的三维结构；

(3)添加无血清细胞培养液浸没生物材料包裹细胞的三维结构，进行无血清培养细胞。

2.如权利要求1所述一种无血清培养细胞的方法，其特征在于，所述步骤(2)中生物材料包括天然生物材料或合成生物材料中的至少一种。

3.如权利要求2所述一种无血清培养细胞的方法，其特征在于，所述步骤(2)中天然生物材料包括壳聚糖及其衍生物、纤维素类材料、海藻酸盐及其衍生物、壳聚糖/甘油磷酸二钠混合物、淀粉类材料、血清白蛋白、明胶及其衍生物、鲱精蛋白、血纤蛋白原、胶原、肽类材料、木聚糖、透明质酸、鱼胶、角蛋白类、促凝血酶原激酶、还原角蛋白中的至少一种。

4.如权利要求2所述一种无血清培养细胞的方法，其特征在于，所述步骤(2)中合成生物材料包括聚氧乙烯-聚乳酸羟基乙酸共聚物、结冷胶、丙烯酸、聚氨基酸、丙烯酸衍生物、聚乙烯醇、嵌段式聚合物、合成肽类材料中的至少一种；优选地，所述聚氨基酸包括聚谷氨酸、聚赖氨酸中的至少一种；优选地，所述丙烯酸衍生物包括卡波姆、聚甲基丙烯酸、聚N-异丙基丙烯酰胺、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸中的至少一种；优选地，所述嵌段式聚合物包括泊洛沙姆。

5.如权利要求1所述一种无血清培养细胞的方法，其特征在于，所述步骤(2)中将预定体积的生物材料水溶液滴加至步骤(1)含有细胞的离心管中，混合生物材料和细胞。

6.如权利要求5所述一种无血清培养细胞的方法，其特征在于，所述步骤(2)中离心管中的细胞个数与生物材料水溶液体积的比例范围为10⁵–10⁹个/mL。

7.如权利要求6所述一种无血清培养细胞的方法，其特征在于，所述步骤(2)中离心管中的细胞个数与生物材料水溶液体积的比例范围为10⁶–10⁸个/mL。

8.如权利要求1所述一种无血清培养细胞的方法，其特征在于，所述步骤(2)中吹打细胞的次数范围为20–200次。

9.如权利要求1所述一种无血清培养细胞的方法，其特征在于，所述步骤(2)中吹打细胞的频率范围为1–5次/秒。

10.如权利要求1所述一种无血清培养细胞的方法，其特征在于，所述步骤(2)中生物材料水溶液的浓度范围为0.1–50wt.％，生物材料水溶液可以形成水凝胶结构包裹细胞，在步骤(3)无血清细胞培养液中水凝胶结构可以稳定存在。