[发明专利]一种布洛芬人工抗原检测探针的制备及其应用

权利要求书

1.一种布洛芬人工抗原检测探针的制备方法，其特征在于，其包括：

步骤Ⅰ：将布洛芬与N,N'-二环己基碳酰亚胺(DCC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)混合，搅拌过夜。

步骤Ⅱ：将步骤Ⅰ反应液于离心后，冰浴环境下将其上清液缓慢加入到与布洛芬质量比1：2.1的HRP溶液中，室温搅拌12h。随后将反应液离心，透析，即得到布洛芬人工抗原，放于4℃下保存备用，随后进行布洛芬人工抗原偶联比测定。

2.根据权利要求1所述的布洛芬人工抗原检测探针的制备方法，其特征在于，所述将布洛芬与N,N'-二环己基碳酰亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺混合，为布洛芬用DMF溶解后，在冰浴下加入与布洛芬摩尔比1.1：1的DCC并搅拌约15min，随后向中加入与DCC摩尔比1：1的NHS，于冰浴下搅拌过夜。

3.根据权利要求1所述的布洛芬人工抗原检测探针的制备方法，其特征在于，在所述步骤Ⅱ中，所述缓慢加入为逐滴加入。

4.根据权利要求1在所述步骤Ⅱ中，HRP溶液浓度为(1mg/mL)最佳。

5.根据权利要求1在所述步骤Ⅱ中，所述布洛芬人工抗原偶联比测定，为将布洛芬人工抗原进行脱盐处理，随后和HRP分别与基质SA混合，点到样品靶上，放入质谱仪中进行激光扫描。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法制得的布洛芬人工抗原检测探针。

7.一种根据权利要求6所述的布洛芬人工抗原检测探针的应用，其特征在于，其包括：

步骤a：首次用辣根过氧化物酶为载体蛋白，经DCC和NSH活化，使布洛芬与HRP偶联，得到布洛芬人工抗原。通过布洛芬与HRP偶联物的质谱图，计算出偶联比；布洛芬人工抗原保留与HRP一样的催化活性，即成功制备同时具有免疫原性和酶催化活性的布洛芬人工抗原；

步骤b：利用布洛芬人工抗原结合直接竞争ELISA法完成对样品中布洛芬中的定性分析。先将布洛芬抗体包被于酶标板上，过夜，洗涤后加入封闭液，洗涤备用；

步骤c：人工抗原可以和尿液样品中布洛芬竞争地与酶标板上的抗体结合，将样品和布洛芬人工抗原检测探针和中加入四甲基联苯胺溶液，静置12-18min进行显色，随后加入H₂SO₄终止显色，于445-455nm处检测吸光度，采用标准曲线法得出所述待测样品中布洛芬人工抗原的含量。

8.根据权利要求7所述的布洛芬人工抗原检测探针的应用，其特征在于，所述步骤c为在所述结合辣根过氧化物酶布洛芬人工抗原检测探针中加入四甲基联苯胺溶液，静置15min进行显色，随后加入H₂SO₄终止显色，于450nm处检测吸光度，采用标准曲线法得出所述待测样品中布洛芬的含量。