[发明专利]胶体金层析试剂条、制备方法以及新冠抗原检测试剂盒

权利要求书

1.一种检测新冠抗原的胶体金层析试剂条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

a)胶体金颗粒溶液制备：将HAuCl₄边搅拌边加热到120℃，加入1/20～1/4体积的柠檬酸钠，继续加热10～30min，直至溶液颜色稳定呈现为红宝石色，冷却后2℃～8℃保存；

b)胶体金纳米花溶液制备：将步骤a)制备的胶体金颗粒溶液加入到60～100倍体积的纯化水中，加热到60℃～80℃后添加HAuCl₄、柠檬酸钠以及氢醌溶液，搅拌，离心后去除上清液，收集合成的胶体金纳米花溶液，2℃～8℃保存；

c)胶体金标链霉亲和素的制备：取步骤b)制备的胶体金纳米花溶液并调整pH值至9～10、浓度至0.01-0.05wt％，加入链霉亲和素溶液，振荡反应5～30min，加入BSA至BSA的终浓度为1-2wt％，振荡5～30min，离心后去除上清液，得到胶体金标链霉亲和素，用金标稀释液复溶备用；

d)生物素化新冠病毒抗原标记抗体和生物素化质控分子抗体的制备：分别将标记抗体和质控抗体采用缓冲液稀释至0.5～2mg/mL，分别透析得到新冠病毒抗原标记抗体溶液和质控分子捕获抗体溶液，分别加入浓度为0.5～2mg/mL生物素溶液室温反应1～6h后，分别加入浓度为0.5～2mol/LNH₄Cl溶液后室温搅拌反应5～30min，分别透析、过柱纯化，得到生物素化新冠病毒抗原标记抗体和生物素化质控分子抗体；

e)胶体金标记链霉素-生物素化新冠病毒抗原标记抗体及胶体金标记链霉素-生物素化质控分子抗体的制备：取步骤d)制得的生物素化新冠病毒抗原标记抗体和生物素化质控分子抗体，分别与步骤c)所制得的胶体金标链霉亲和素混合振荡反应10～30min，离心后去除上清液，分别得到胶体金标记链霉素-生物素化新冠病毒抗原标记抗体和胶体金标记链霉素-生物素化质控分子抗体，分别用金标稀释液复溶备用；

f)偶合垫的制备：用偶合物稀释液稀释步骤e)制备得到的胶体金标记链霉素-生物素化新冠病毒抗原标记抗体和胶体金标记链霉素-生物素化质控分子抗体制成偶合物处理液，其中，胶体金标记链霉素-生物素化新冠病毒抗原标记抗体的体积占比为18％-20％，胶体金标记链霉素-生物素化质控分子抗体的体积占比为20％-25％，用偶合物处理液均匀涂布于偶合垫；

g)制备硝酸纤维素膜：将纳米纤维素凝胶稀释至浓度为0.1wt％～0.5wt％后划线于硝酸纤维素膜上形成检测线、质控线，干燥；将新冠抗原捕获抗体和质控分子捕获抗体分别用NC膜包被液稀释到1～3mg/mL、0.1～2mg/mL后划线于检测线、质控线处，干燥；

h)样品垫的制备：将样品垫处理液均匀涂抹于样品垫；

i)试剂条的组装：按照所述试剂条的结构组装。

2.根据权利要求1所述的检测新冠抗原的胶体金层析试剂条的制备方法，其特征在于，步骤b)包括：将步骤a)制备的胶体金颗粒溶液加入到60～100倍体积的纯化水中，加热到60℃～80℃后添加0.5～3倍体积的HAuCl₄、1～7倍体积的柠檬酸钠，搅拌15～60s后加入10～40倍体积的氢醌溶液，搅拌3～6h，离心。

3.根据权利要求1所述的检测新冠抗原的胶体金层析试剂条的制备方法，其特征在于，步骤c)中，链霉亲和素溶液的终浓度为10～80μg/mL；

和/或，NC膜包被液由0.01～0.5mol/LpH 6.5～7.5的PBS和3～10wt％的海藻糖溶液配制而成。

4.根据权利要求1～3任意一项所述的检测新冠抗原的胶体金层析试剂条的制备方法，其特征在于，所述样品垫上的样品垫处理液吸收量为在25～50±3mL，所述样品垫于50℃～70℃干燥24h，或者室温自然晾干；

和/或，对组装后的试剂条切割至2～4mm/条，并分别装入壳体。