[发明专利]蛋白质纯化方法

说明书

本发明公开了一种蛋白质纯化方法，该方法包括：将待纯化的蛋白质样品的pH值调节至第一pH值；将所述蛋白质样品加载于阳离子层析柱；和，采用包括第一缓冲液和第二缓冲液的洗脱剂进行线性梯度洗脱。该方法可以有效地降低碱性峰，同时提高主峰占比，整个分离纯化工艺简单，缓冲液成分简单且价格便宜，能够很好的满足工业化应用中的要求。

技术领域

本公开属于蛋白质分离纯化技术领域。具体而言，本公开涉及一种纯化蛋白质的方法。

背景技术

经重组技术表达的抗体是复杂的多聚体糖蛋白，例如包括二聚体、四聚体等糖蛋白。表达的抗体常呈现出各种性质的不均一，包括电荷、疏水、形态等相关的异构体。由于抗体分子所带电荷差异造成的电荷异质性称为电荷异构体，一般可分为酸性异构体和碱性异构体。通常来讲，酸性异构体相对于目标蛋白具有较低的等电点，而碱性异构体相对于目标蛋白具有较高的等电点。

产生电荷异构体的主要原因包括蛋白的C-末端赖氨酸截除，N-末端谷氨酰胺/谷氨酸环化，N糖基化，氧化，半胱氨酸残基，分子片段和多聚集引起的异质性等。抗体的电荷异构体可能会影响抗体药物的结构稳定性、生物学活性、免疫原性、药代动力学等，从而对抗体药物在临床使用时的有效性、安全性和保质期等都会有重大影响。

目前常用的去除电荷异构体的方法通常有阴离子交换层析技术和阳离子交换层析技术。这些技术通常需要复杂的缓冲液，或者需要多加预洗步骤等方式以到达去除电荷异构体的目的。

因此，需要能够分离蛋白质产物，特别是表达的抗体产物中的电荷异构体的简单的纯化方法。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述技术问题之一，本公开提供了一种纯化蛋白质的方法，尤其提供了一种去除蛋白质中碱性异构体的方法。

根据本公开的一个方面，提供了蛋白质纯化方法，其特征在于，所述方法包括：将待纯化的蛋白质样品的pH值调节至第一pH值；将所述蛋白质样品加载于阳离子层析柱；和，采用包括第一缓冲液和第二缓冲液的洗脱剂进行线性梯度洗脱，所述第一缓冲液的pH值为所述第一pH值。根据本公开的一些实施方式，所述蛋白质的等电点＝第一pH值+n，n为1至2。

根据本公开的一些实施方式，所述第一pH值为5.0至6.8。根据本公开的一些实施方式，所述第一pH值为5.5至6.5。根据本公开的一些实施方式，所述第一pH值为5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4或6.5。

根据本公开的一些实施方式，所述第一缓冲液选自10～100mM磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、10～100mM磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液或10～100mM柠檬酸-磷酸-Tris缓冲液。

根据本公开的一些实施方式，所述第二缓冲液的pH值大于所述蛋白质的等电点。根据本公开的一些实施方式，所述第二缓冲液选自10～100mM磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、10～100mM磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液或10～100mM柠檬酸-磷酸-Tris缓冲液。

根据本公开的一些实施方式，所述蛋白质的等电点为6.5至8.0。根据本公开的一些实施方式，所述蛋白质的等电点为6.5～7.6，例如可以为6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5或7.6。

根据本公开的一些实施方式，所述蛋白质为融合蛋白质或单克隆抗体。根据本公开的一些实施方式，所述蛋白质为单克隆抗体，可以包括鼠源抗体、兔源抗体、人源抗体或全人抗体。根据本公开的一些实施方式，所述蛋白质为单特异性抗体或双特异性抗体，例如，英夫利昔单抗(Infliximab)，帕尼单抗(Panitumumab)，派姆单抗(Pembrolizumab)，瑞替珠单抗(Reslizumab)，卡妥索单抗(Catumaxomab)。