[发明专利]一种利用研究型正置显微成像系统定量分析斑马鱼黑色素的方法

权利要求书

1.一种利用研究型正置显微成像系统定量分析斑马鱼黑色素的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：

1)对被测量的斑马鱼进行可视化处理，使用研究型正置显微镜捕获斑马鱼图像，得到一组斑马鱼体表明敞图像；

2)然后利用Python和open CV对该组图像进行相关性计算处理，对斑马鱼原始图像进行二值化处理转换为灰度图像，再将图像划分为多个矩形；统计每一张图像上斑马鱼轮廓内的矩形面积S_{矩(斑马鱼)}以及斑马鱼轮廓内黑色素所占的矩形面积S_{矩(黑色素)}；按式(1)计算每一组斑马鱼的黑色素面积，得到一组数据，即为斑马鱼的黑色素面积数据，

其中S_{矩(斑马鱼)}表示图像中斑马鱼轮廓的矩形面积，S_{矩(黑色素)}表示图像上斑马鱼轮廓中黑色素的面积。

2.根据权利要求1所述的利用研究型正置显微成像系统定量分析斑马鱼黑色素的方法，其特征在于，所述的研究型正置显微成像系统为：Axio Imager.2荧光正置显微镜。

3.根据权利要求1所述的利用研究型正置显微成像系统定量分析斑马鱼黑色素的方法，其特征在于，所述的研究型正置显微成像系统在拍摄时，使用5×的放大镜，保持系统的参数一致，从而得到一组斑马鱼明敞图像文件。

4.根据权利要求1所述的利用研究型正置显微成像系统定量分析斑马鱼黑色素的方法，其特征在于，所述的相关性计算处理的方法为：使用open CV进行斑马鱼图像读入处理，将图像进行灰度化和二值化，使图像转换为黑白两个色度；然后使用Canny边缘检测器获取图像目标边框信息，该检测器是使用多阶段算法检测图像中边缘范围；然后将斑马鱼体表上的黑色素转化为黑点，根据目标边框信息裁剪图像，使图像划分为k×k的矩形框，判定每个矩形框，通过图像背景滤波规则晒出异常点，并且计算出图像黑白面积以及异常值，再对异常值进行过滤处理；对过滤后的矩形框进行编号，最后对每个矩形框统计其黑点的面积S_{矩(黑色素)}。

5.根据权利要求1所述的利用研究型正置显微成像系统定量分析斑马鱼黑色素的方法，其特征在于，对被测量的斑马鱼进行可视化处理具体包括下述步骤：

1)在恒温为28.5℃的培养箱中培育斑马鱼胚胎24hpf至72hpf，使用不同浓度的药物处理斑马鱼胚胎，在48hpf至受精后第三周的时间段内观察斑马鱼体表黑色素情况；

2)控制恒定的实验环境，将研究型正置显微镜与计算机等设备连接起来，开启计算机软件；

3)将羧甲基纤维素放在盖玻片上，将待测的斑马鱼放在羧甲基纤维素上，固定好斑马鱼，然后将放有斑马鱼的盖玻片放在显微镜的载物台上，调整好需要的放大倍数进行聚焦；

4)利用计算机软件采集斑马鱼体表图像。